1、傳代前24h先將組織塊去除：等到細胞覆蓋瓶底80％以上后進行組織塊去除操作。可用彎頭玻璃吸管將組織塊輕輕挑起吸出，確保無組織塊留下，以防壞死污染。

2、胰酶消化：倒掉舊培養液，用D－HANKs液清洗兩邊，加入已預熱（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后鏡下觀察，發現胞質收縮，細胞間隙增大，立即用含胎牛血清的培養液終止消化。

3、彎頭吸管吹打細胞：吹打一定時間后到鏡下觀察，在沒吹打起細胞區域繼續吹打，動作要柔和。

4、離心：2000轉5min。倒掉上清液，加入培養液，吹打成散在細胞。

5、計數和接種。

6、貼壁后更換培養液：由于消化不當或其他原因，接種后的細胞可能會有死細胞及其他雜質影響細胞生長，所以貼壁后（一般6h）要更換培養液。