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巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)
一、原理
在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過(guò)細(xì)胞zui易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大。
目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油，它們對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。

ATCC細(xì)胞,傳代細(xì)胞

人肺退行性癌細(xì)胞，Calu-6細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，NCI-H1395細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H358細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，HCC827細(xì)胞
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1688細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1299細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞，2BS細(xì)胞
人支氣管上皮樣細(xì)胞，BEAS-2B細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞，CCC-HPF-1細(xì)胞
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞，CCC-HBE-2細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，Calu-3細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，DMS 153細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，95-D細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞，GLC-82細(xì)胞
人肺細(xì)胞，HLF-a細(xì)胞

二、操作步驟
凍存:
1.消化細(xì)胞（同實(shí)驗(yàn)二），將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
2.1000rpm離心10分鐘，棄上清液。
3.沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。
4.將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
5.將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
6.貼上標(biāo)簽，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。
7.按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃ 1小時(shí)）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。
注意：操作時(shí)應(yīng)小心，以免液氮凍傷。液氮定期檢查，隨時(shí)補(bǔ)充，不能揮發(fā)干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
復(fù)蘇:
1、準(zhǔn)備一個(gè)茶缸或1000ml的燒壞，內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng)。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。
3、打開凍存管，將細(xì)胞懸液吸到離心管中。
4、1000rpm離心10分鐘，棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養(yǎng)液，吹打均勻，再離心10分鐘，棄上清液。
6、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng)，第二天觀察生長(zhǎng)情況。
試劑和器材:
器材：液氮罐、凍存管（塑料螺口凍存管或安瓿瓶）、離心管、吸管、離心機(jī)等
試劑：0.25％胰酶、培養(yǎng)基、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基（即凍存液）
附：凍存液配制：
培養(yǎng)基加入甘油或DSMO，使其終濃度達(dá)5—20%。保護(hù)劑的種類和用量視不同細(xì)胞而不同。配好后4℃下保存。

人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H520細(xì)胞
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 PG-BE1細(xì)胞
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株 PG-LH7細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 A-427細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞 SK-LU-1細(xì)胞
人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H2227細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H23細(xì)胞
人肺腺鱗癌細(xì)胞 NCI-H596細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H838細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 LTEP-s細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 LTEP-sm細(xì)胞
人肺鱗癌瘤株 LTEP-s細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H1703細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H2170細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H524細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞 SPC-A1細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 H125細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 H1299細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞 TKB-1細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，LTEP-a-2細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，Lu-165細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H460細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞，SPC-A-1細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，095-D細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞，SK-MES-1細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H661細(xì)胞
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞，NCI-H292細(xì)胞