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通派(上海)生物科技有限公司
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胚胎成纖維細胞

傳代細胞 人結直腸癌細胞,DiFi細胞

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ELISA

一、包被抗原

1.用50mM的碳酸鹽包被緩沖液(pH9.6)溶解抗原,使抗原濃度為10-20μg/ml,加100ul/孔到96孔酶標板,4oC放置過夜。

2.第二天棄去包被液后,用PBST洗滌3次,每孔加入150ul 1%BSA37oC封閉1小時。

3.PBST洗滌3次后,每孔加入100ul不同倍比稀釋度的血清,并加入對照樣品,37oC孵育2小時。

4.PBST洗滌5次后,加入100ul稀釋后的 HRP標記的二抗,37oC孵育1小時。

5. PBST洗滌5次后,顯色劑顯色20min后,酶標儀上讀取A405吸收值。

人胃腺癌細胞,SGC-7901細胞
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人肺鱗癌細胞 NCI-H2170細胞
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人肺腺癌細胞 SPC-A1細胞
人肺癌細胞 A549細胞
人非小細胞肺癌細胞 H125細胞
人肺癌細胞 H1299細胞
二、包被細胞

1.在96孔培養板上接種細胞數為1X104 cells/well,37℃過夜培養。
2.第二天用 PBS洗滌培養板2-3次。

3.加入125ul/well 10% Forma lin(1:10稀釋),室溫下固定15min。

4.用ddH2O洗滌培養板3次,并晾干,儲藏在2-8oC備用。
5.用PBST洗滌3次,每孔加入150ul1%BSA 37oC封閉 1小時。

6. PBST洗滌3次后,每孔加入100ul不同倍比稀釋度的血清,并加入對照樣品,37oC孵育2小時。

7. PBST洗滌5次后,加入100ul稀釋后的 HRP標記的二抗,37oC孵育 1小時。

8. PBST洗滌 5次后,顯色劑顯色20min后,酶標儀上讀取 A405吸收值。50mM的碳酸鹽包被緩沖液:0.05mol/LpH9.6碳酸緩沖液,4℃保存,Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至 100 ml。ABTS作為底物進行顯色反應(10ml):0.2M Na2HPO4  2.4ml  0.1M檸檬酸 2.6ml ddH2O  ABTS 5ml 5mgH2O2(30%)4 ul(用前加入)

注意:
一般做倍比稀釋進行檢測,需要有相應的對照血清。不同的顯色系統對應不同的光吸收值。


人小細胞肺癌細胞,DMS 153細胞
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人肝癌細胞,BEL-7402細胞
人胚胎腸粘膜組織來源細胞,CCC-HIE-2細胞
人正常肝細胞,L-02細胞
人胰腺癌細胞,PANC-1細胞
人肝癌細胞,Hep G2細胞
人結直腸癌細胞,T84細胞
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人結直腸腺癌細胞,HCT 116細胞
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