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真空冷凍干燥法
安瓿管的準備清洗
選用中性玻璃材質的安瓿管。先用2%鹽酸浸泡8～10小時，自來水沖洗至pH值為中性，再用蒸餾水洗2～3次，置烘箱中烘干備用。
真空干燥 ATCC細胞,傳代細胞,BD培養基,菌種
預凍后將安瓿管放入真空箱中，開動真空泵進行干燥。采用無制冷設備的凍干裝置，在開動真空泵后應使真空度在15分鐘內達到66.5Pa，隨后逐漸達到26.6～13.3Pa，在此條件下，樣品將保持凍結狀態，其中水分則不斷升華，干燥才能順利地進行。
采用離心式凍干裝置，在安瓿管放于離心架上后，先開動離心機，再開動真空泵。當樣品基本干燥后，真空度將達到2.67～4Pa，此時如凍干裝置具有后干燥設備，則打開油擴泵，使樣品進一步干燥1～2小時。
使用具有溫度控制設備的凍干裝置，在凍干過程中當真空度達到26.6Pa時，樣品中水分大量升華，這時可以開始加溫，以便加速樣品中水分升華。
標簽
激光打印機打印標簽，標簽上標明菌株編號和保藏日期，大小約為10×20mm，標簽可插入管內或貼于管外，也可直接噴碼在安瓿管表面，位置應距離管底約5mm左右，噴碼要經160℃固定20分鐘才能進行滅菌。
滅菌
塞好棉塞，將同一菌號的安瓿管包在一起，121℃滅菌30分鐘，備用。
保護劑的準備
蒸餾水配制12%脫脂牛奶作為保護劑，每支試管分裝2～5mL，加塞，再包一層牛皮紙捆好。滅菌鍋加熱至水沸騰，再將包好的試管放入滅菌鍋內，113℃蒸汽滅菌20分鐘。
打開放氣閥緩慢排出蒸汽，氣壓降到0時打開滅菌鍋，取出滅完菌的脫脂牛奶試管，迅速放入涼水中冷卻。冷卻后的脫脂牛奶試管于30℃培養2天，經無菌檢查合格后備用。
凍干樣品的制備
斜面培養物的制備參照附錄A，要求培養至成熟期或穩定期。無菌條件下將12%
的脫脂牛奶用無菌吸管注入到培養好的斜面中，用吸管刮取斜面上的菌體，使菌體均勻地懸浮在保護劑內，注意勿將培養基刮破，也不可使菌懸液產生較多的氣泡，菌懸液中細胞濃度應不低于106個/mL。
用長的無菌毛細滴管將菌懸液分裝到無菌的安瓿管內，每支分裝0.1～0.2mL。操作時要把帶有菌懸液的長毛細滴管直接插入安瓿管的底部，勿使菌液沾在管壁上。
預凍
從制備菌懸液開始，經分裝到進行預凍之間的時間不宜超過1小時。可采用以下幾種方式預凍：分裝完成后將安瓿管立刻放入－35～－40℃冰箱預凍1小時，使菌液*凍結。可采用分段式預凍，先將分裝好的安瓿管置－20℃凍30分鐘，再放入－80℃冰箱凍30分鐘。采用離心式凍干裝置時勿需預凍。
