流式細(xì)胞儀流程:
在線客服 : :tongpaibio
基本操作:
1:收集細(xì)胞:胰酶消化各孔(6孔板),收集到離心管,離心得沉淀;
2:用PBS打勻,洗1-2遍,離心,沉淀;
3:沉淀的細(xì)胞中加入500uL緩沖液,得懸液;
4:加5uL AnnexinV-FITC(細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒),混勻;
5:5uLPI混勻;(4)-(6)三組需要避光操作!
6:流式細(xì)胞儀測(cè)定。(4×105/孔,6孔板,2mL/孔) 若第二天流式測(cè)量,可加5—10mL70%乙醇,在4℃固定8h以上。
人肺腺癌細(xì)胞,Lu-165細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H460細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞,SPC-A-1細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,095-D細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞,SK-MES-1細(xì)胞
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H661細(xì)胞
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞,NCI-H292細(xì)胞
人肺退行性癌細(xì)胞,Calu-6細(xì)胞
MTT溶液的配制:MTT濃度為5 mg/mL,溶于PBS或無(wú)酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22 um濾膜過(guò)濾以除去溶液里的細(xì)菌,放4℃避光保存即可。
注:
在酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果時(shí),為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性,MTT吸光度在0-0.7范圍;
MTT一般現(xiàn)用現(xiàn)配,過(guò)濾后4℃,避光保存2周有效,或保存在-20℃長(zhǎng)期保存;避免反復(fù)凍融,小劑量分裝,用避光袋、錫箔紙包裹;一般把MTT粉分裝在EP管,再現(xiàn)用現(xiàn)配,當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)絕不能再用;
人肺腺癌細(xì)胞,NCI-H1395細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H358細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,HCC827細(xì)胞
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H1688細(xì)胞
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H1299細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞,2BS細(xì)胞
人支氣管上皮樣細(xì)胞,BEAS-2B細(xì)胞
MTT致癌,用時(shí)帶透明薄膜手套。
制備細(xì)胞凋亡單染管:
活細(xì)胞
一半活細(xì)胞+一半死細(xì)胞(高溫滅活-水浴90℃)+FITC(染色活Cell)
一半活細(xì)胞+一半死細(xì)胞+PI(PI-碘化丙啶染色核酸,但不能穿透細(xì)胞膜即染色死Cell)
一半活細(xì)胞+一半死細(xì)胞+FITC(堿性環(huán)境與抗體蛋白反應(yīng),主要是與賴氨酸的氨基與熒光素的硫碳胺鍵結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合)+PI PBS的配制:(1000mL) NaCl 8.0 g 、KCl 0.2 g、 KH2PO4 0.2 g 、Na2HPO4.12H2O 2.9 g 加超純水至1000mL高壓蒸汽滅菌,4℃儲(chǔ)存,備用。 細(xì)胞器具清洗: 瓶、管等+潔消精(過(guò)夜12 h),自來(lái)水沖洗25遍,蒸餾水沖1-2遍,蒸餾水泡過(guò)夜12 h,烘干,高壓蒸汽滅菌(約2 h),再烘干,至少2-3天,方可用。
人胚肺成纖維細(xì)胞,CCC-HPF-1細(xì)胞
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞,CCC-HBE-2細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞,Calu-3細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,DMS 153細(xì)胞
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞,95-D細(xì)胞
人低分化肺腺癌細(xì)胞,GLC-82細(xì)胞
人肺細(xì)胞,HLF-a細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞,HEL-1細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞,HEL-2細(xì)胞
人肺癌細(xì)胞,H1299細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞,KMB-17細(xì)胞
人胚肺細(xì)胞系,KuMA細(xì)胞
人肺鱗癌細(xì)胞,LTEP-s細(xì)胞
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,LTEP-sm細(xì)胞
人肺鱗癌瘤株,LTEP-s細(xì)胞
人胚胎心肌組織來(lái)源,CCC-HEH-2細(xì)