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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
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傳代細(xì)胞培養(yǎng)基

時(shí)間:2015/7/24閱讀:1258
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公司實(shí)驗(yàn)室長期提供各內(nèi)人類腫瘤細(xì)胞,正常細(xì)胞,耐藥株,癌細(xì)胞株。動(dòng)物腫瘤細(xì)胞,正常細(xì)胞,耐藥株,癌細(xì)胞株。具體細(xì)胞培養(yǎng)條件,代數(shù)以及來源問題請與在線客服咨詢。
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傳代細(xì)胞培養(yǎng)基   什么是個(gè)性化培養(yǎng)基?它有什么優(yōu)點(diǎn)?      

根據(jù)細(xì)胞類型、培養(yǎng)方式和生產(chǎn)工藝等特點(diǎn)所定制的培養(yǎng)基,即個(gè)性化培養(yǎng)基。個(gè)性化培養(yǎng)基在國外生物制藥企業(yè)被普遍采用,個(gè)性化培養(yǎng)基可以為細(xì)胞生長提供充足的營養(yǎng)物質(zhì),能提高細(xì)胞的生長速率、培養(yǎng)密度、以及延長細(xì)胞維持時(shí)間;也可以為細(xì)胞生長提供均衡的營養(yǎng)供給,減少細(xì)胞有害代謝物質(zhì)的積累,降低對細(xì)胞生長的危害;同時(shí)對貼壁細(xì)胞而言,能增加細(xì)胞的貼壁性,并降低培養(yǎng)過程中剪切力對細(xì)胞的損傷;個(gè)性化培養(yǎng)基可以根據(jù)各戶的特殊需求減少或不使用動(dòng)物源成分,從而使生物制品安全性更有保障。 

細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,可否繼續(xù)使用?      
如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,您應(yīng)該自然溶解培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基。

細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?      
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原來細(xì)胞生長用的新鮮培養(yǎng)基均勻混合。注意:由于DMSO稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中,必須使用前先行配制完成。 

培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎?      
大部分添加物和試劑zui多可以凍融3次,如果次數(shù)過多會(huì)將使含有的蛋發(fā)生降解和沉淀,這將會(huì)影響它的性能。  

液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?      
要冷藏!!通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月到一年。

低血清培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎?     
低血清培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值,建議使用pH計(jì)進(jìn)行測定。 

低血清培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么?     
平衡鹽一般是由無機(jī)鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統(tǒng)、Earle′s系統(tǒng)、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。199系列培養(yǎng)基、MEM系列培養(yǎng)基均有Hanks′系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle′s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。但是有些培養(yǎng)基均不是以上常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng),例如RPMI 1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng),該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。

谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么?     
以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例:稱取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分?jǐn)嚢杌靹颉S?.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應(yīng)在4℃下避光保存,2周內(nèi)使用。以7.5% NaHCO3的配制為例:稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。 

什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?     
酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響,可以通過純化技術(shù)去除,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長,當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。

放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會(huì)發(fā)生變化,為什么?
培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)CO2 會(huì)逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿后再用于細(xì)胞培養(yǎng)將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時(shí),可以通入無菌過濾的CO2,以調(diào)整pH值。 

無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎?      
當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí),降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。因?yàn)檠逯械牡鞍讜?huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。而在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活。 

培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?      
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

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