細胞：COS-7細胞
中文名稱：非洲綠猴SV40轉化的腎細胞
生長特性：貼壁細胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在 1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當的培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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擴增
為克服干細胞數目少的局限性,研究人員致力于開發(fā)干細胞體外擴增技術.然而,要使干細胞在長期擴增中保持未分化狀態(tài)和多系分化潛能,研究人員尚面臨著巨大挑戰(zhàn)。
含已知細胞因子和生長因子的無基質無血清體外培養(yǎng)物最終目的是應用于臨床,而造血細胞在臨床上有廣泛應用前景。目前科學家已成功開發(fā)體外培養(yǎng)人造血干細胞(HSC)技術以獲得大量HSC。
IL-3、干細胞因子(SCF)和Flt-3配體(FL)具有早期效應和細胞系非特異性造血刺激功能, 因而在干細胞擴增中頗受青睞。但目前為止,還沒有獲得這方面HSC體外擴增的確鑿證據。
在加入FL、TPO(thrombopoietin) 、IL-6 和IL-11條件下,臍血HSC得以程度地擴增。PDGF-BB和EGF則使人BMSC程度地擴增。神經元祖細胞已從人皮質培養(yǎng)物中成功分離,并在EGF和FGF-2條件下擴增,200天不到的時間內細胞數增加了150萬倍。
過去十年內這些體外干細胞和祖細胞擴增實驗的開展歸功于重組細胞因子和細胞篩選技術的進展,因此,發(fā)現新細胞因子和已有細胞因子的新功能可促進干細胞擴增研究。另外, 系統(tǒng)性分析生長因子受體的表達有助于設計干細胞體外擴增培養(yǎng)的新方法.
