人胰腺導管癌細胞ES-2細胞 HE染色(脫蠟、水化、染色、脫水、封片)
脫蠟
在二甲苯脫蠟之前可以先在60℃烤箱內0.5~1小時,這樣可以使切片粘附更牢固不易脫片,也有利于脫蠟。
二甲苯I 10分鐘
二甲苯II 5分鐘
切片用二甲苯脫臘,應視不同的季節有不同的脫蠟時間,在夏天,室溫較高,脫蠟較迅速,往往在2-3min就可脫蠟干凈,二在冬季,時間應相對延長。
切片在進入二甲苯前,可用電吹風吹切片,使切片上的蠟處于熔解狀態,這樣脫蠟較迅速,尤其是冬天。
在二甲苯脫蠟之前可以先在60℃烤箱內0.5~1小時,這樣可以使切片粘附更牢固不易脫片,也有利于脫蠟。
水化
100%酒精I 5分鐘
100%酒精II 5分鐘
95%酒精I 5分鐘
95%酒精II 5分鐘
85%酒精 3分鐘
人胰腺導管癌細胞ES-2細胞 HE染色75%酒精 2分鐘
蒸餾水沖洗 1分鐘
筆者認為,切片用酒精將二甲苯*消除后,在進入蘇木素染液前,可用電吹風吹干,這一步對于切片沒有充分的烤片時間,對于血塊等的切片來說,尤為重要,切片經此步驟,增加了附貼的牢固性,減少切片在染色過程中脫離載片的機會,保證了染色的成功率。另者,切片進入蘇木素染液全無水,可保證了蘇木素染液的濃度和PH值,延長其使用壽命。以往切片進入蘇木素染液前,都須經水洗,每次染色,都帶入不少的水分,稀釋了蘇木素染液的濃度,改變了它的PH值,使染液壽命縮短。
染色
蘇木精染液中浸5~20min
自來水沖洗3~5min
1%鹽酸酒精分化5~30s
自來水沖洗1~3min
0.5%伊紅酒精染色 1分鐘
人胰腺導管癌細胞ES-2細胞 HE染色蒸餾水洗 2分鐘
蘇木素染液有多種,常規應用的通常為明礬蘇木素,明礬蘇木素又有Harris蘇木素,Mayer’s蘇木素,和Ehrish蘇木素等。
鹽酸酒精分化切片,濃度有0.25%,0.5%和1%根據各人的情況而使用。
伊紅酒精濃度有0.25%,0.5%和1%之分,根據各單位的情況而定。
分化伊紅須用濃度較高的酒精,以往伊紅染色以后,用低濃度的酒精分化,洗去多余的染液,實踐中發現低濃度的酒精褪色能力特強,如果掌握不好,染上的伊紅,便會被褪去大部分。改用較高濃度酒精后,這種現象便不會出現。
伊紅有水溶的和醇溶的,如果用的是水溶的,應該在脫水前進行染色,如果是醇溶的,應使用與溶解伊紅等濃度的酒精開始脫水。
鹽酸酒精:在100ml的70%酒精內加0.5~1ml的濃鹽酸。