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人Burkitt淋巴瘤細胞 Raji細胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用

時間:2013/11/6閱讀:1453
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  人Burkitt淋巴瘤細胞 Raji細胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用

 
(一)細胞培養(yǎng)在臨床病原學(xué)診斷中應(yīng)用
  臨床上多種病原生物如病毒、立克次體、衣原體、胞內(nèi)寄生的細菌、原蟲等的分離培養(yǎng)和藥物敏感試驗是通過細胞培養(yǎng)技術(shù)完成的,如人免疫缺陷病毒(HIV)和新近出現(xiàn)的嚴重急性呼吸綜合征(SARS)病毒等就是通過細胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)的。臨床應(yīng)用微量全血培養(yǎng)技術(shù)診斷HIV的感染,已用于兒童HIV垂直感染的早期診斷及可疑感染者的確認。
  1. 病毒的分離的常用細胞 
  對病毒性疾病的病原學(xué)診斷,zui可靠的方法是從標本中分離并鑒定出致病性病毒。由于病毒具有嚴格的細胞內(nèi)寄生性,對病毒的分離培養(yǎng)必須選用敏感的細胞,包括動物、雞胚和細胞培養(yǎng)。目前zui被廣泛采用的方法就是細胞培養(yǎng)技術(shù)。用于病毒分離的細胞種類很多,由于不同種類病毒對細胞的敏感性不同,因此首先應(yīng)根據(jù)病毒的種類選擇敏感細胞進行分離培養(yǎng)。細胞的種類按其來源、染色體特征及傳代次數(shù)等可分為原代細胞、二倍體細胞及傳代細胞3種類型。但由于原代細胞只能傳1~3代,器官來源、操作繁鎖等問題使該方法應(yīng)用受限,而二倍體細胞和傳代細胞,由于可以長期傳代、培養(yǎng)方便,故較為常用。
   人Burkitt淋巴瘤細胞 Raji細胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用2. 體外抗病 效試驗
抗病 效測定試驗分為體內(nèi)試驗和體外試驗。體外試驗是采用組織細胞培養(yǎng)法來觀察藥物的抗病毒作用。在實驗中要根據(jù)藥物的特性來選擇病毒;根據(jù)病毒對細胞易感性選擇所用細胞;觀察藥效指標常采用病毒致細胞病變(CPE)情況來判定藥物的抗病毒效果。下面以抗呼吸道病 物為例采用微量細胞培養(yǎng)法介紹藥物體外抑病毒試驗方法。
  (二) 細胞培養(yǎng)在臨床腫瘤診斷中的應(yīng)用
  1.腫瘤細胞端粒與端粒酶活性檢測 
  真核細胞染色體末端含有串連重復(fù)的DNA序列,稱為特殊的DNA一蛋白質(zhì)端粒結(jié)構(gòu)。當正常體細胞分裂時,端粒的末端均會隨每次的復(fù)制被逐漸縮短,端粒的定長可能與正常細胞的有限分裂代數(shù)(約50代左右)有關(guān),待端粒結(jié)構(gòu)縮短至zui后時,細胞即不再能分裂,這從整體上也限制了機體壽命的長短。原核細胞、真核細胞中的某些種系,很多腫瘤細胞等獲得了不死性,說明它們具有延長端粒的性能,能將新生的重復(fù)序列加到染色體的末端,這就是端粒酶(omerase)的作用。人的正常體細胞無端粒酶活性,這些酶的重新活化可能使細胞獲得了無限分裂的能力,故端粒酶的活性檢測,可被作為惡性腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移的潛在標記。
  2.腫瘤細胞與細胞凋亡
  細胞凋亡是細胞在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序去結(jié)束生命的過程。這是保證多細胞生物個體正常發(fā)育、成熟和維持生理過程所必需的?,F(xiàn)已知,細胞凋亡作為一種細胞內(nèi)源性基因調(diào)控下的生理性死亡方式,此過程如發(fā)生障礙,不僅能成為腫瘤發(fā)生的主要機制之一,而且也與腫瘤的治療和耐藥性的形成密切相關(guān)。目前認為多種化學(xué)結(jié)構(gòu)不同、作用機制各異的抗腫瘤藥物,均可誘導(dǎo)腫瘤細胞逆轉(zhuǎn)出現(xiàn)凋亡。因此,掌握細胞凋亡的檢測方法,不僅可篩選抗腫瘤藥物,而且可用以研究腫瘤的發(fā)生及消亡機制。
  3.腫瘤細胞體外藥物敏感性檢測
  化學(xué)療法是治療惡性腫瘤的主要手段之一,但臨床醫(yī)師普遍存在著盲目用抗癌藥的情況。為提供合理用藥的科學(xué)依據(jù),利用來源于手術(shù)切除或活檢組織中分離的腫瘤細胞,進行抗癌藥物敏感性測定,可為臨床醫(yī)生合理選擇有效藥物提供參考,現(xiàn)介紹幾種常用的方法。
  (三)細胞培養(yǎng)在臨床病因診斷中的應(yīng)用
  由于對造血干細胞的研究取得成功,故臨床上利用造血細胞培養(yǎng)作為造血干細胞克隆性疾病的診斷和療效分析的常用方法。造血干細胞約占細胞總數(shù)的0.4%,可向多種定向祖細胞分化增殖,所以不同類型的造血干細胞克隆性疾病,如骨髓增生異常綜合征(MDS)、急、慢性白血?。ˋML、CML)、再生障礙性貧血(AA)、骨髓增生性疾病等,其造血細胞的集落分析均有一定特點,如重癥再生障礙性貧血患者的骨髓、外周血培養(yǎng)幾乎都無集落形成,可能與混合集落形成細胞(cfu-MIX)培養(yǎng)階段發(fā)生障礙有關(guān)。另一項專門技術(shù)是用來診斷與染色體變化相關(guān)的疾病,如判定和發(fā)現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常的綜合征。取自骨髓、外周血、絨毛膜、羊水中胎兒脫落細胞和臍血、皮膚等各種組織,使這些細胞在一定條件下培養(yǎng),使之大部分細胞處于有絲分裂并停止在分裂中期相,進一步使細胞核體積脹大,以利于進行染色體分析。染色體分析是產(chǎn)前診斷的主要內(nèi)容之一,此外臨床上更多的是用于細胞遺傳學(xué)診斷并成為臨床診斷白血病、判斷預(yù)后和觀察治療效果的重要方法學(xué)。(見產(chǎn)前診斷、遺傳病實驗診斷等相關(guān)章節(jié))。
  人Burkitt淋巴瘤細胞 Raji細胞培養(yǎng)在臨床診斷中應(yīng)用?。ㄋ模┰谂R床實驗診斷中對細胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用的評價
  1.培養(yǎng)技術(shù)繁雜,需具備一定的實驗條件才能開展。
  2.細胞培養(yǎng)技術(shù)在某些方面的應(yīng)用是不可替代的。如分離培養(yǎng)病毒等細胞內(nèi)寄生的病原體。
  3.細胞在體外培養(yǎng),由于環(huán)境及條件的局限性,應(yīng)避免將體外培養(yǎng)細胞的實驗結(jié)果機械地看作體內(nèi)同種細胞性狀的必然反映。如體外篩選的抗病 物或抗腫瘤藥物,在體外有效不等于在體內(nèi)就一定有效。
  4.細胞培養(yǎng)技術(shù)的臨床應(yīng)用方興未艾,地、市級以上的醫(yī)院里應(yīng)積極創(chuàng)造條件建立細胞培養(yǎng)實驗室,開展對病毒、腫瘤等實驗診斷工作,以體外實驗結(jié)果輔助體內(nèi)的各項檢查。 
  5.細胞培養(yǎng)技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)、信息學(xué)和計算機技術(shù)等結(jié)合,在細胞水平與分子水平之間互動,在研究生命活動規(guī)律和診斷疾病方面將發(fā)揮更大的作用。
 
 
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