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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
SK-MEL-1細(xì)胞 SKLU1細(xì)胞 SKHEP1細(xì)胞 SKBR3細(xì)胞 SiHa細(xì)胞 SH-SY5Y細(xì)胞 SCaBER細(xì)胞 Saos-2細(xì)胞 RPMI 8226細(xì)胞 RL95-2細(xì)胞 RKO細(xì)胞 Reh細(xì)胞 RD細(xì)胞 Ramos細(xì)胞 Raji細(xì)胞 QSG-7701細(xì)胞 QGY-7703細(xì)胞 QGY-7701細(xì)胞 PLC/PRF/5細(xì)胞 PC-3細(xì)胞 PANC-1細(xì)胞 PA-1細(xì)胞 OVCAR-3細(xì)胞 OS-RC-2細(xì)胞 NTERA-2細(xì)胞 NCI-N87細(xì)胞 NCI-H838細(xì)胞 NCI-H661細(xì)胞 NCI-H596細(xì)胞 NCI-H520細(xì)胞 NCI-H460細(xì)胞 NCI-H446細(xì)胞 NCI-H358細(xì)胞 NCI-H295R細(xì)胞 NCI-H292細(xì)胞 NCI-H23細(xì)胞 NCI-H209細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞 NCI-H1650細(xì)胞 NCI-H1688細(xì)胞 NCI-H157細(xì)胞 NCI-H1395細(xì)胞 NCI-H1299細(xì)胞 KLE細(xì)胞 LNCaP細(xì)胞 LoVo細(xì)胞 LS180細(xì)胞 LS174T細(xì)胞 MCF 10A細(xì)胞 MCF7細(xì)胞 MEG-01細(xì)胞 MG-63細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞 NAMALWA細(xì)胞
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石蠟切片制備 elisa試劑盒 說(shuō)明書(shū)大全

時(shí)間:2013/12/13閱讀:2000
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取材與固定
切取組織時(shí)應(yīng)使用鋒利的刀、剪,切取組織塊時(shí),從刀的根部開(kāi)始向后拉動(dòng)切開(kāi)組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm,大小為1.5cm x 1.5cm x 0.3cm為宜。取好的組織塊用10%緩沖中性福爾馬林(甲醛)液固定24~48h。
10&福爾馬林(甲醛):100ml甲醛+900ml水。
10%緩沖中性福爾馬林(甲醛)液:100ml甲醛+900ml水+4gNaH2PO4+6.5gNa2HPO4。
NBF另一配方:50ml甲醛+450ml水+8.18425gNa2HPO4*12H2O+2.2666gNa2HPO*2H2O
10%中性福爾馬林(甲醛)液:100ml甲醛+900ml水+碳酸鈣加至飽和 (以容器底部碳酸鈣沉淀1~2cm厚為適度)充分振蕩混合后,放置24小時(shí)取上清液使用。
固定液的用量一般為組織體積的10~20倍,容器不要過(guò)小,材料也不要太多;應(yīng)避免組織緊貼瓶底或瓶壁,以免影響固定液的滲入。

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水洗
固定后的組織塊的沖洗,一般情況下是置水下以自來(lái)水流水沖洗,這樣可以使組織中的固定液隨時(shí)溢出,洗得更干凈*,有些還需要進(jìn)行特殊的洗滌。
各種以水配制的固定液如甲醛,都必須用流水沖洗,大塊組織一般沖洗24小時(shí),小塊組織一般沖洗2—10小時(shí)。
固定液為多聚甲醛時(shí),用于免疫組織化學(xué)等特殊染色的應(yīng)將組織投入PB緩沖液中,每60分鐘更新洗滌液一次,累計(jì)6小時(shí)。沖洗好的組織可存放在75%酒精內(nèi)
脫水

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從30%乙醇開(kāi)始,經(jīng)過(guò)50%、70%、80%、95%、100%至*脫水。一般各級(jí)乙醇中放置45min到1h。
脫水必須在有蓋瓶中進(jìn)行,以防止高濃度乙醇吸收空氣中水分導(dǎo)致濃度降低而使脫水不*。需要保存的材料可脫水至70%乙醇時(shí)停留其中,如需長(zhǎng)期保存,可加入等量的甘油。
透明
二甲苯作用較快,透明力強(qiáng),但組織塊在其中停留過(guò)久,容易收縮變脆變硬,同時(shí)若脫水不凈,就會(huì)引起不良后果,在應(yīng)用時(shí)必須特別小心。通常將組織塊先經(jīng)純乙醇與二甲苯的等體積混合液,再進(jìn)入純二甲苯,這樣可減少上述的缺點(diǎn)。透明時(shí)間應(yīng)由組織大小而定,—般各級(jí)停留時(shí)間在30min至2h,在純二甲苯中應(yīng)更換2次,總時(shí)間則以不超過(guò)3h為宜。材料經(jīng)過(guò)透明,會(huì)顯示出前一步脫水的效果如何,若脫水*,組織則顯現(xiàn)透明狀態(tài),如組織中有白色云霧狀,說(shuō)明脫水不凈,須返工處理,但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明時(shí),應(yīng)避免其揮發(fā)和吸收空氣中的水分,并保持其無(wú)水狀態(tài)
透臘
透蠟須在恒溫箱中進(jìn)行,恒溫箱的溫度調(diào)節(jié)至高于石蠟熔點(diǎn)3度,使經(jīng)過(guò)透明的組織塊依次用石蠟與二甲苯的等量混合液、純石蠟處理。純石蠟應(yīng)處理2~3次,透蠟的時(shí)間依材料性質(zhì)而定,一般每次需15~30min。
在60度恒溫蠟箱中放置3個(gè)蠟杯,分別編號(hào)1(52℃~54℃)、2(52℃~54℃,或54℃~56℃)、3(56℃~58℃),其中分別盛軟蠟、軟蠟、硬蠟,取透明好的組織塊放入軟蠟中各1小時(shí),迅速取出放入硬蠟,如果時(shí)間來(lái)及包埋,可以將已經(jīng)完成浸蠟的組織塊取出放在溫箱外,第二天繼續(xù)。
包埋
包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。具體做法是;先準(zhǔn)備好紙盒,將熔蠟倒入盒內(nèi),迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在紙盒底部,切面朝下,再輕輕提起紙盒,平放在冷水中,待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳⒓埡邪慈胨校蛊溲杆倮鋮s凝固,30min后取出。
包埋用蠟的溫度應(yīng)略高于透蠟溫度,保證組織塊與周?chē)?融為一體。石蠟的迅速冷卻也很重要,否則包埋塊中將會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶。以后切片時(shí)引起碎裂。
①準(zhǔn)備包埋蠟:一般應(yīng)用硬蠟(56~58℃或60~62℃)為好,所用的石蠟要求透明無(wú)雜質(zhì),新的石蠟要反復(fù)熔凝,并有一定的粘韌性,可以加一些蜂蠟。蠟的熔點(diǎn)應(yīng)與組織的硬度相適應(yīng)。包埋用過(guò)的石蠟可以反復(fù)使用。
②準(zhǔn)備包埋框:可以用金屬的,也可以用硬紙摺疊。
③點(diǎn)燃酒精燈,準(zhǔn)備好無(wú)齒尖鑷子,需作標(biāo)記應(yīng)先寫(xiě)好標(biāo)簽。
④在金屬框中倒入硬蠟,然后用無(wú)齒鑷子取組織塊放入石蠟中,置好方向。可室溫下冷卻。
⑤包埋框或紙盒內(nèi)的蠟逐漸凝結(jié),若表面已凝結(jié)形成一層固體狀,即可放入冷水中,加速其凝固。
⑥待蠟塊*凝固以后,便可拆卸包埋框架, 或拆開(kāi)紙盒,取出蠟塊。
切片
展片、撈片和貼片
烤片
展好的切片在室溫下稍微干燥后,放在40℃恒溫烤箱中,小片組織30分鐘即可,大的需12~24小時(shí),烤干備用。

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