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人B淋巴細胞瘤細胞Ramos細胞 支原體污染的檢測

時間:2014/12/8閱讀:1197
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人B淋巴細胞瘤細胞Ramos細胞 支原體污染的檢測
相差顯微鏡觀察 將細胞接種于事先放置于培養瓶內的支持物(一般用長形蓋玻片),24 小時后用清潔塵鑷子從培養瓶中取出支持物,細胞面向上放置于載物片上,再蓋上較大蓋玻片,用相差油鏡觀察;若不用支持物培養法,直接取少許培養液滴在載物片上,再蓋上蓋片觀察亦可。支原體在鏡下呈暗色微小顆粒,多位于細胞與細胞之間,有時可見類似于布朗運動的表現。應注意與細胞破碎溢出的內容物如線粒體等相區別。

人組織細胞淋巴瘤細胞U937 U-937細胞
人神經膠質細胞瘤細胞U251細胞
人急性單核細胞白血病細胞THP-1細胞
人結直腸癌細胞T84細胞
人腎上腺皮質癌細胞SW-13細胞
小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0-Ag14細胞
兔主動脈平滑肌細胞SMC細胞
人皮膚黑色素瘤細胞SK-MEL-1細胞
人腦瘤細胞SF767細胞
人腦瘤細胞SF763細胞
人腦瘤細胞SF126細胞
人B淋巴細胞瘤細胞RAMOS(RA.1)細胞
人B淋巴細胞瘤細胞Ramos細胞
人胃腺癌細胞BGC-823 BGC823細胞
小鼠小膠質細胞BV2細胞
非洲綠猴腎細胞CV-1 CV1細胞
人B淋巴細胞瘤細胞Ramos細胞 支原體污染的檢測 低漲處理地衣紅染色觀察 取已在培養瓶中的支持物蓋片或培養液,用新鮮配制的 0.5%枸椽酸溶液處理蓋片細胞。用新配制的 Carnoy 液固定兩次,每次 10 分鐘,取出蓋片涼干。用培養液時,先吸取 1mL,500~800r/min 離心 5 分鐘后去除上清,留 0.2mL,將 0.5%枸椽酸溶液加入其中,置 10 分鐘,加入 Carnoy 液固定,離心棄上清固定液,余 0.2mL 沉淀物,制成 2~3張涂片。然后用 2%醋酸依地紅(地衣紅 2g,冰醋酸 60mL,加蒸餾水至 100mL)染 5 分鐘。純酒精過三次,每次 1 分鐘,封入 Euparal 或樹膠中。若染色過深,可先用 75%酒精脫色,再封片。鏡下觀察見支原體呈暗紫色小點,位于細胞外或細胞之間。

人乳腺癌細胞MDA-MB-435S細胞
小鼠胚胎成纖維細胞NIH/3T3細胞
人惡性多發性畸胎瘤細胞NTERA-2細胞
小鼠睪丸畸胎瘤細胞P19細胞
人卵巢畸胎瘤細胞PA-1細胞
小鼠胚胎成纖維細胞PA12細胞
人胰腺癌細胞PANC-1細胞
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞PC-12 PC12細胞
人成骨肉瘤細胞Saos-2細胞
人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞
人卵巢腺癌細胞SK-OV-3 SKOV3細胞
人骨肉瘤細胞U-2 OS U2OS;U2-OS;U-2OS細胞
小鼠血細胞WEHI-3細胞 WEHI3
小鼠成纖維細胞Φ2細胞
人橫紋肌肉瘤細胞A-204細胞
人肺腺癌細胞Calu-3細胞
非洲綠猴腎細胞(SV40轉化)COS-7 COS7細胞
人腎癌Wilms細胞G401細胞

人B淋巴細胞瘤細胞Ramos細胞 支原體污染的檢測 支原體污染的檢測  熒光染色法觀察 用熒光染料 Hoechst33258,此染料能與 DNA 特異地結合,可使支原體內的 DNA 著色,然后用熒光顯微鏡觀察。染色方法為:用支持物蓋片培養法將細胞接種在蓋片上,在細胞匯合前(即未長滿前)取出玻片,于碟皿中,用不含酚紅的 Hanks 液漂洗,1:3醋酸鉀固定 10 分鐘,再用生理鹽水漂洗后置于 50μg/mL 的 Hoechst33258(生理鹽水配制)中染色 10 分鐘,置于蒸餾水漂洗 1~2 分鐘,向細胞面滴加數滴 pH5.5 磷酸緩沖液,然后置熒光顯微鏡下觀察。若用細胞培養液,先離心去除上清液,再加入 Hanks 液漂洗,離心棄上清后加入1:3 醋酸甲醇固定 10 分鐘,再用生理鹽水漂洗后去上清液,再用 Hoechst33258 染色 10 分鐘,加入蒸餾水漂洗,離心去上清蒸餾水,加 3~5 滴 pH5.5 磷酸緩沖液,稍吹打使沉淀細胞重懸浮,用吸管吸出,滴于載物片上,蓋上蓋片后觀察。熒光顯微鏡下支原體呈綠色小點,散在于細胞周圍或附于細胞表面。

人肝癌細胞Hep G2 HepG2細胞
人包皮成纖維細胞HFF細胞
人早幼粒急性白血病細胞HL-60細胞
人骨肉瘤細胞HOS細胞
人慢性髓系白血病細胞K562細胞
人前列腺癌細胞LNCaP細胞
人乳腺癌細胞MCF 7B細胞
小鼠紅白血病細胞MEL細胞
人急性淋巴母細胞性白血病細胞MOLT-4細胞
人胚肺成纖維細胞MRC-5細胞
人小細胞肺癌細胞NCI-H209細胞
人Burkitt淋巴瘤細胞Raji細胞
小鼠垂體瘤細胞AtT-20 AtT20細胞
非洲綠猴腎細胞VERO細胞
 

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