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變所用聚合酶及Buffer2015/12/31
基因定點突變變所用聚合酶及Buffer引物和質粒都準備好后，當然就是做PCR嘍，不過對于PCR的酶和buffer，不能用平時的，我們做PCR把整個質粒擴出來，延伸長度達到幾個K，所以要用那些GCbuf...
肺癌細胞2015/12/30
基因定點突變一、定點突變的目的把目的基因上面的一個堿基換成另外一個堿基。二、定點突變的原理通過設計引物，并利用PCR將模板擴增出來，然后去掉模板，剩下來的就是我們的PCR產物，在PCR產物上就已經把這...
人肺癌細胞 A-4272015/12/29
動物基因組DNA的提取實驗步驟:在無液氮的條件下，鍘備鼠肝DNA，與有液氮條件下相比，產量和質量都有所下降。整個操作過程中，應盡量避免DNA酶的污染，特g4注童動作溫和，減少對DNA的機械捌傷。1、取...
人胚肺轉化細胞 SL-12015/12/28
動物基因組DNA的提取實驗原理:在EDTA和SDS等去污劑存在下，用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提，可以得到哺乳動構基因組DNA，用此方法得到的DNA長度為100-150kb，適用于L嘴菌體構建基因組...
人肺癌細胞 A-4272015/12/24
單核苷酸多態性（SNP）實驗SNP即單核苷酸多態性，是由于單個核苷酸改變而導致的核酸序列多態性。據估計，在人類基因組中，大約每千個堿基中有一個SNP，無論是比較于度多態性分析還是微衛星標記，都要廣泛得...
人胚肺二倍體細胞 HEL-22015/12/24
單核苷酸多態性（SNP）實驗SNP即單核苷酸多態性，是由于單個核苷酸改變而導致的核酸序列多態性。據估計，在人類基因組中，大約每千個堿基中有一個SNP，無論是比較于度多態性分析還是微衛星標記，都要廣泛得...
羊膜細胞 WISH細胞2015/12/23
變性梯度凝膠電泳:實驗步驟1．PCR反應.其中，上游引物加40bp[GC]Clamp。2．PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳確認。3．垂直變性梯度凝膠電泳293細胞人胚腎細胞293T細胞人胚腎細胞293T/1...
A172細胞 人膠質母細胞瘤細胞2015/12/21
變性梯度凝膠電泳:變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm）。Tm...
Tca-8113細胞，人舌鱗癌細胞2015/12/18
SSR分子標記實驗:PCR反應實驗操作注意事項:PCR反應過程中應特別注意不要使樣品相互污染，以免造成試驗結果不準確，同時也要注意所加試劑或樣品必須是經過混勻后的液體，這樣才能保證反應液各成分的濃度和...
293細胞 人胚腎細胞2015/12/17
SSR分子標記實驗:實驗步驟1、玻璃板清洗：1）用洗滌劑把玻璃反復擦洗干凈，用酒精擦干、干燥。在疏水玻璃板上均勻涂上300-500μL的0.5%的疏水劑BindingSilane。可放置夜。2）配制凝...
DNA提取過程中的注意事項2015/12/16
SSR分子標記實驗DNA提取過程中的注意事項:(1)避免試驗材料間DNA的交叉污染或外來DNA的污染。使用冷凍干燥葉片法，可以將每個樣品在單獨的離心管中研磨，研磨使用的小鋼珠球是一次性的，如果是反復使...
B16細胞 小鼠黑色素瘤細胞2015/12/15
SSR分子標記實驗操作及其注意事項:SSR(SimpleSequenceRepeats)又稱微衛星DNA，是一類由幾個(多為1~6個)堿基組成的基序(motif)串聯重復而成的DNA序列，其長度一般較...
EL4細胞 小鼠淋巴瘤細胞2015/12/14
WesternBlot常見問題分析SDS-PAGE電泳：1、膠不平？凝膠漏液？a:膠板洗刷干凈b:加入APS和TEMED的量要合適c:加入試劑后搖勻，使其充分混合，防止部分膠塊聚合不均勻d:溫度合適，...
人咽鱗癌細胞 FaDu細胞2015/12/11
SouthernBlot原理及實驗方法SDS-PAGE實驗注意事項:1.SDS與蛋白質的結合按質量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白質），蛋白質含量不可以超標，否則SDS結合量不足。2.用SDS-聚丙...
非小細胞肺癌細胞 HCC827細胞2015/12/10
SouthernBlot原理及實驗方法SDS-PAGE實驗原理原理：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑N，N’—亞甲基雙丙烯酰胺（簡稱Bis）在催化劑作用下，聚合交聯而成的具有網狀立體結...
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