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常用的兔ELISA試劑盒背景問題

閱讀:458發(fā)布時間:2015-1-18

    如果您一直被兔ELISA試劑盒所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、兔ELISA試劑盒抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用,因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟M肊LISA試劑盒因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低特異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

   同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、兔ELISA試劑盒脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過,它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。另一點(diǎn)也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。兔ELISA試劑盒如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。
如果您的兔ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔(dān)心,依次查看兔ELISA試劑盒系統(tǒng)中的組分,并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,相信很快就會有漂亮的結(jié)果。


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