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酶聯免疫吸附法中有技術問答精辟解析

閱讀:428發布時間:2015-2-9

問:人的Quantikine ELISA試劑盒是否有相關的對照?

答:上海撫生R&D 為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對照組。請同我們以便確定產品的目錄號。

問:我想使用你們目錄中的重組蛋白作為我的ELISA的對照,但我發現質量上有差異。這是為什么?

答:首先要考慮的是重組蛋白的質量會高出試劑盒的可測試范圍數倍,必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升,在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。

其次要考慮的是R&D Elisa試劑盒的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的,這種測定是在試劑盒時與標準蛋白校正過的。這些經過測定的早期標準蛋白成為基本校正物,后來的標準都同它校正。這樣不同批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質量的測定方法有所不同。

問:什么是競爭性ELISA?

答:競爭ELISA基于競爭結合技術,即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子(我們一般用堿性磷酸酶作為標記)同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競爭,參照標準曲線,試驗數據值是定量的。

問:什么是夾心ELISA?

答:夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體,然后用第二個帶標記的抗體作檢測,檢測抗體對分析物也是專一的。當參照標準曲線時,試驗數據值是定量的。

問:什么是直接ELISA?

答:直接ELISA是將被測的分析物直接包膜在微孔板表面,然后用測試抗體來證實被測分析物的存在。當與重組蛋白(標準曲線)進行參照時,試驗數據值是半定量的。


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