九九热免费在线观看_毛片女人毛片一级毛片毛片_欧美在线视频一区二区_在线免费看av片_精品视频9999_99视频网站

上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

15000017673

ELISA試劑盒
菌種
國(guó)家細(xì)胞
蛋白
科研抗體
國(guó)家培養(yǎng)基
標(biāo)準(zhǔn)品
生化試劑
ATCC細(xì)胞庫(kù)
elisa檢測(cè)試劑盒
感受態(tài)細(xì)胞
RNA/DNA提取
PCR試劑盒
細(xì)胞
生化檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞試劑

ELISA 檢測(cè)常用樣本處理方法

時(shí)間:2021/9/15閱讀:1449
分享:
  ELISA是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定量分析方法。樣本的處理對(duì)于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功有舉足輕重的作用。
 
  利用 ELISA 進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括:血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、陰道分泌物等。
 
  下面我們就常用的樣本處理方法:
 
  血液樣本
 
  血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理,使血清(漿)從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來(lái)。
 
  Q: 血清與血漿的區(qū)別?
 
  A: 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,故血漿中除尚含有纖維蛋白原和 抗凝劑外,其他成份均等同于血清。
 
  Q: 選擇血清還是血漿樣本?
 
  A: 由于血清中缺乏很多的凝血因子,但有凝血產(chǎn)物。如果測(cè)凝血因子建議選擇血漿樣本;同時(shí)血漿中有纖維蛋白原,如果纖維蛋白原對(duì)待檢測(cè)指標(biāo)有影響,建議選擇血清樣本。
 
  大多數(shù)情況下二者均可以選擇。
 
  處理方法:
 
  血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4 度過(guò)夜,然后1000×g 離心20分鐘,取上清即可。這是一個(gè)讓血液自然凝固的過(guò)程,溫度越低,凝集越緩慢,可根據(jù)需要添加促凝劑。
 
  血漿:血漿樣本需要抗凝,一般建議用2.0%EDTA,1%肝素,3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2~8度1000g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè)。根據(jù)待檢測(cè)目標(biāo)物的性質(zhì)不同選取不同的抗凝劑。
 
  枸櫞酸鈉(檸檬酸鈉):Ca2+有凝血作用,枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,從而阻止血液凝固。配成 109mmol/L的濃度和血液1:9, 106mmol/L的濃度和血液1:4
 
  缺點(diǎn):血液中溶解度低,抗凝作用較弱。
 
  優(yōu)點(diǎn):對(duì)凝血因子有很好的保護(hù)作用,大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝。
 
  二胺四乙酸(EDTA)鹽:與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物, 從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10
 
  優(yōu)點(diǎn):對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞形態(tài)影響小。
 
  缺點(diǎn):影響血小板的聚集。不適用于凝血實(shí)驗(yàn)和血小板功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢 測(cè)。
 
  肝素:通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,增強(qiáng)抗凝血酶的作用,滅活絲氨酸蛋白 酶,從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L 與血液 1:10
 
  優(yōu)點(diǎn):抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫。
 
  缺點(diǎn):引起白細(xì)胞聚集。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用,否則放置過(guò)久血 液又可凝固。
 
  組織樣本(組織樣本一般是制成組織勻漿)
 
  處理方法:
 
  1)取適量組織塊,于預(yù)冷 PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液, 稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
 
  2)可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃 勻漿器,加入 5-10ml 預(yù)冷 PBS(組織與 PBS 的質(zhì)量體積比建議為 1:5,即 1g 樣 本加入 5ml PBS)進(jìn)行充分研磨(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿),該過(guò)程需在冰 上進(jìn)行;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過(guò) 程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù) 2 次)。
 
  3)將制備好的勻漿液于 5000×g 離心 5 分鐘,留取上清即可檢測(cè)。
 
  4)如果樣本需要長(zhǎng)期保存,請(qǐng)?zhí)砑拥鞍酌敢种苿8鶕?jù)實(shí)驗(yàn)需要,組織勻 漿樣本可先定量總蛋白,以便于統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本如肝臟,腎臟,腦 組織會(huì)有假陽(yáng)性反應(yīng)。
 
  細(xì)胞樣本
 
  根據(jù)目的物所在部位,可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。需要注意的是:
 
  因該類樣本干擾因素較多,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
 
  如果目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本;
 
  如果目的物主要存在于胞內(nèi),則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本類型。
 
  處理方法:
 
  細(xì)胞培養(yǎng)上清:處理方法相對(duì)簡(jiǎn)單,取細(xì)胞培養(yǎng)上清,1000×g 離心 20 分 鐘,取上清即可檢測(cè)。
 
  細(xì)胞裂解液:
 
  1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收 集)
 
  2)將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗 3 次
 
  3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):
 
  i 超聲破碎:取適量 PBS 重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞 懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂;
 
  ii 反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20 度以下冰凍,室溫融解,反復(fù) 3 次,使細(xì)胞溶脹破碎;
 
  4)將標(biāo)本于 2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,收集上清備用。
 
  一般情況下,物理方法如反復(fù)凍融,勻漿等方法會(huì)比化學(xué)方法好,因?yàn)榛?學(xué)方法會(huì)引入酸或堿,可能會(huì)對(duì) elisa 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。我們也做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng) 測(cè)化學(xué)提取液和洗滌劑對(duì) ELISA 檢測(cè)的影響,如 RIPA、TritonX-100、NP-40 和 SDS、脫氧膽酸鈉、β巰基乙醇、DTT。
 
  痰液
 
  1)選擇痰液中較為粘稠部分稱重,加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇), DTT 的主要作用是溶解粘液,用吸管反復(fù)吹打,漩渦器振蕩 15s,37 度恒溫水浴振蕩 5 分鐘;
 
  2)加入兩倍于痰量的 PBS 緩沖液繼續(xù)振蕩 15-20 分鐘,150 目的金屬絲網(wǎng)過(guò)濾,1500 rpm 離心 10 分鐘吸取上清液檢測(cè)。
 
  糞便
 
  盡量采集干的糞便,糞便過(guò)稀會(huì)較難處理且降低檢測(cè)的準(zhǔn)確性。采集的重量應(yīng)大于50mg,將糞便用PBS洗3次(最終糞便質(zhì)量:PBS 體積=1:9),用超聲粉碎(或搗碎)后于5000×g離心10分鐘,取上清檢測(cè)。
 
  唾液
 
  將樣品收集于離心管后在-70 度冰凍 1 小時(shí)。在冰上融化樣品后,2000×g 離 心 10 分鐘,取上清檢測(cè)。
 
  皮膚組織
 
  用勻漿機(jī)加冰的 PBS 研磨 20-50 mg 的皮膚組織使其充分溶解,離心 20 分 鐘,10000 g/分鐘,取上清檢測(cè)。
 
  牛乳
 
  于4度,12000g/分鐘離心30分鐘,去除上層脂肪,以及下層沉淀,取中間層樣本用于檢測(cè)。
 
  腦脊液、肺泡灌洗液
 
  樣本收集后于1000×g 離心20分鐘,離心后收集上清,并將標(biāo)本保存于-20度,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 
  處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程,由于蛋白容易變性,降解,故 該過(guò)程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融, 樣本處理之后可分裝密封保存,4 度保存應(yīng)小于1周,-20 度不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月,-80 度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。
 
  在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的第一步,以上就是關(guān)于Elisa特殊樣本處。
 

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国内精品a | wwwwxxxxx日本| 国产精品视频公开费视频 | av性色全交蜜桃成熟时 | 成人深夜福利视频在线观看 | h七七www色午夜日本 | 唯美欧美亚洲 | 男女猛烈啪啪无遮挡免费观看 | 国产放荡对白视频在线观看 | 国产欧美一区二区三区视频 | 嘿咻视频免费网站 | 特级生活片 | 国产一区二区片 | 亚欧洲乱码视频 | 一区免费在线观看 | 久久最新金品视频免费播放 | 澳门 成人av | 桃子视频在线观看高清免费视频 | 丝袜办公室秘书啪啪到哭 | 国产日韩一级 | 17c在线视频观看免费播放 | 国产精品嫩草影视 | 日本亚洲三级 | 夜鲁夜鲁狠鲁天天在线 | 九九热在线视频播放 | 误杀2国语版免费观看 | 国产精品热久久久久夜色精品三区 | 成人在线你懂的 | 国产精品一区波多野结衣 | 亚洲欧美国内爽妇网 | 国产成人精品久久亚洲高清不卡 | www亚洲精品少妇裸乳一区二区 | 久久精品国产日本波多麻结衣 | 热久久久久久久久久 | 国产91xxx| 国产第一页福利影院 | 欧美高清在线观看 | 九一免费视频 | 剑来高清在线观看 | 日韩偷拍一区二区 | 一级特黄在线 |