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一步式細菌 DNAout50 次成分

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更新時間:2019-01-24 08:52:04瀏覽次數:565次

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.一步式細菌 DNAout50 次成分詳細介紹:
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實驗要點 :
1..一步式細菌 DNAout50 次成分CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。  
2.在適條件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質,特別是多糖,使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.飽和酚雖然可有效地使蛋白質變性,但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和的混合液,可減輕這兩種現象,同時可加入適量的(苯酚—=25:24:1),的作用是消泡,并使蛋白質層緊密,使水相和有機相分層較好。 細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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注意事項:
1. .一步式細菌 DNAout50 次成分組織和細胞取材速度要快,在獲取后應當盡快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰凍組織不能用RNAwait保存,因為RNAwait不能有效滲入冰凍組織。
3. 保存樣品的RNA提取:樣本從-20℃或-80℃冰箱取出后,復蘇到室溫后,取出組織塊,再用于提取RNA。細胞樣本則復溫后低速離心收集細胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后繼的處理(如組織勻漿)可以在室溫下進行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保護。殘留少量RNAwait保存液不影響后繼提取RNA的質量。

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