操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：PLK1抑制劑(Rigosertib sodium)

英文名稱：Rigosertib sodium

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產品貨號：BJ-01X7442

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Cucumber Green Mottle Mosaic Virus(CGMMV)黃瓜綠斑駁花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-SIRT1(Ser47)  磷酸化沉默調節蛋白1抗體 規格: 0.1mlPhospho-Troponin I(Ser23/24)  磷酸化鈣調節蛋白-1抗體 規格: 0.1ml

Koi Herpesvirus(KHV)錦鯉皰疹病毒Sph基因探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FBXO38  F-box蛋白38抗體 規格: 0.2mlCD3/CD3-ε  CD3抗體 規格: 0.1ml

Streptococcus mitis輕型鏈球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NNT  核苷酸轉抗體 規格: 0.2mlHECA  HECA蛋白抗體 規格: 0.2ml

Penicillium viridicatum純綠青霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-rat IgM/Bio  標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.1mlPhospho-HSL (Ser865)  磷酸化荷爾蒙敏脂肪抗體 規格: 0.1ml

Herba lysimachiae金錢草染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Jagged 2  Notch配體Jagged 2蛋白抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgG 規格: 0.1ml

Kudoa septempunctata七星庫道蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周C11orf24  11號染色體開放閱讀框24抗體 規格: 0.2mlphospho-DAXX (Ser517)  磷酸化Fas相關死亡結構域蛋白抗體 規格: 0.1ml

Schistosoma mattheei,羊血吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CNTROB  易基因2相互作用蛋白抗體 規格: 0.2mlPNPLA1  含patatin樣磷脂1抗體 規格: 0.2ml

Flos chrysanthemi indici野菊花探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周DcR3/TR6  誘捕受體3抗體 規格: 0.1mlCadherin 8  鈣粘附蛋白8抗體 規格: 0.2ml

Madurella spp.馬杜拉分枝LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgM 規格: 0.1mlphospho-FER/TYK3(Tyr402)  磷酸化酪蛋白激3抗體 規格: 0.1ml

Culicoides spp.庫蠓通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-NFKBIB (Ser23)   磷酸化KB抑制蛋白β抗體 規格: 0.1mlMuc2  粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體 規格: 0.1ml

PLK1抑制劑(Rigosertib sodium)delta opioid受體激動劑（[D-Ala2]leucine-enkephalin）

胱天蛋白酶抑制劑(Biotin-VAD-FMK)

EGFR抑制劑(RG14620)

B-Raf和c-Raf抑制劑（B-Raf IN 1）

DNA拓撲異構酶II抑制劑(Ellipticine hydrochloride)

HCT-15細胞增殖抑制劑(Kinetin riboside)

激酶抑制劑（2,4-Pyrimidinediamine）

HDAC抑制劑(Oxamflatin)

MEK抑制劑

PI3K抑制劑(PF-4989216)

HAA抑制劑(MKC9989)