5-HIAAELISA Kit檢測原理:
本試劑盒采用競爭ELISA法。用5-HIAA抗原包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的5-HIAA
與包被的5-HIAA競爭*標記的抗5-HIAA單抗上的結合位點，游離的成分被洗去。加入辣根
過氧化物酶標記的親和素，*與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。
加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標
儀在450nm波長處測OD值，5-HIAA濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標準曲線計算出樣品中
OT的濃度。
樣品收集:
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集
血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘，取上清即可
檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會
影響測量結果），稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組
織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，
取上清檢測。
4. 細胞培養上清：取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
6. 樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。
7. 樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍
存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融。
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先
做預實驗，以確定稀釋倍數）。
5-HIAAELISA Kit
試驗所需自備物品:
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
檢測前準備工作:
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結
晶，屬于正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超
過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，
靜置10分鐘，上下顛倒數次，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為100ng/mL）。然后根據
需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：100、
50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0ng/mL，標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。
如配制50ng/mL標準品：取0.5mL 100ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋
5-HIAAELISA Kit
液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。
4. *化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以50μL/孔計），實際配制時應多配
制100-200μL。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當日使用。
5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制
100-200μL。使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。
標準品稀釋方法圖例：（以500μL/管為例，也可根據實際用量來稀釋，如200μL/管）
