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ELISA試劑盒研發的靈敏度

閱讀:653發布時間:2018-9-29

ELISA試劑盒研發的靈敏度


此刻可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA試劑盒研制成果吸光度的光度計。酶標儀的首要性能指標有:測讀速度、讀數的準確性、重復性、準確度和可測范圍、線性等等。優良的酶標儀的讀數一般可準確到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。酶標儀不該安頓在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,運用前先預熱儀器15-30 分鐘,測讀成果更安穩。
測讀A 值時,要選用產品的靈敏吸收峰,如OPD 用492nm 波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第2次在不靈敏波長(W2),兩次測定間不 移動ELISA試劑盒研制板的方位,zui終測得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可削減由容器上的劃痕或指印等構成的光攪擾。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗刷劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,然后削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗。
 洗板時留意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需求稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率在1.5us/cm 之下,洗液如果結晶應待其融解后制造。保證洗板浸泡時刻為40 秒左右,孔內液體被洗板機吸收得越潔凈洗刷作用更好,手藝洗板避免洗液在孔內構成氣泡。
洗刷在ELISA試劑盒研制過程中雖不是一個反響過程,但卻決議著試驗的勝敗。ELISA試劑盒研制就是靠洗刷來到達別離游離的和結合的酶標記物的意圖。通過洗刷以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反響過程中非特異性地吸附于固相載體的攪擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗刷時應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。可以說在ELISA試劑盒研制操作中,洗刷是zui首要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴厲按要求洗刷,不得馬虎。
 


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