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技術(shù)文章

如何找到ELISA配對抗體

閱讀：427發(fā)布時間：2016-5-16

    單克隆抗體制備時很多朋友會遇到這樣的問題，即我們免疫用的蛋白為原核表達(dá)蛋白而目的蛋白是真核蛋白或病毒等，因為沒有標(biāo)準(zhǔn)品我們做出來的抗體沒有辦法用標(biāo)準(zhǔn)品來驗證是否與其發(fā)生反應(yīng)，zui終導(dǎo)致我們做出的是無用抗體。以下內(nèi)容為我公司實驗室技術(shù)總結(jié)的幾種方法供大家參考，希望對大家有所幫助。
一、若要檢測的抗原為某種新的病毒
方法：1、大量做出該病毒某個蛋白的單克隆抗體；    
      2、大量采集該病毒疑似感染動物或人血液，用PCR的方法進(jìn)一步確定每份血液是否真的有該病毒存在；  
      3、將你做出的大量抗體中的一個做標(biāo)記作為標(biāo)記抗體，其他所有抗體作為包被抗體，檢測第二步中確定陽性的血清，結(jié)果與陰性血清做對比，并畫出點狀分布圖。若陽性血清大部分的點在陰性血清之上恭喜你找到配對抗體了；若結(jié)果相差不大，請重新標(biāo)記一株抗體做相同實驗。
二、若要檢測抗原為某一細(xì)胞因子
方法：1、通過超表達(dá)的方法建立穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，注意要在目的蛋白上加相應(yīng)的標(biāo)簽，以便純化。若僅僅是找到配對抗體則不需要純化甚至不需要建立穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系瞬時轉(zhuǎn)染就可實現(xiàn)，若要進(jìn)一步作出標(biāo)準(zhǔn)曲線請純化。
     2、 將細(xì)胞系建立后，我們就可以拿到標(biāo)準(zhǔn)品了，做配對工作就相應(yīng)簡單。
     3、若該種細(xì)胞因子可有某種陽性刺激物大量刺激而來，也可不做細(xì)胞系。用陽性刺激物刺激，我們細(xì)胞刺激物的上清液來做標(biāo)準(zhǔn)品也可。


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