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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)的加樣原理

閱讀:955發(fā)布時(shí)間:2019-5-29

                                                     ELISA實(shí)驗(yàn)的加樣原理

  ELISA是免疫學(xué)中常用檢測(cè)方法,在ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加樣也是極為重要的步驟之一。


  正確的加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁加入,應(yīng)注意角度太小,會(huì)使液體殘留在孔壁上,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確;吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處!

 

  要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。


  血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8 ℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。 


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