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     依據待測樣品數量加上規范品的數量決議所需的板條數。每個規范品和空白孔建議做復孔。每個樣品依據自己的數量來定，人ELISA試劑盒能運用復孔的盡量做復孔。

      參加稀釋好后的規范品50ul于反應孔、參加待測樣品50ul于反應孔內。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時。

      甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。ELISA試劑盒假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。

      甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。每孔參加底物A、B各50ul，ELISA試劑盒悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘，避免光照。