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DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書

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詳細介紹

DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書實驗要點 :

1.CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。 
2.在適條件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質,特別是多糖,使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.飽和酚雖然可有效地使蛋白質變性,但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可減輕這兩種現象,同時可加入適量的(*——=25:24:1),的作用是消泡,并使蛋白質層緊密,使水相和有機相分層較好。 細菌的培養(yǎng)和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時至對數生長后期。非凍型組織RNA保存液 小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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操作流程:
1. DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書根據要保存的各樣本的體積,計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍(100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集2×107細胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是:量寧多勿少。建議在實際操作中不要稱量組織,而直接根據目測結果加入RNAwait量,以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊,體積為125mm3=125µl,故應當加入1.25ml的RNAwait液。
2.  將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中。
3.  快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀,較小的組織直接取下,立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入,組織中間部位的RNA不能受到保護。較大的組織可以切成厚度<0.5 cm的任意片狀后保存,較小的組織(如大鼠的腎臟、脾臟,小鼠的大部分器官)則可以直接浸入RNAwait。
4.  將收集管存放于溫度適當的地方,存放時間不能超過該溫度下的長存放時間(請看技術指標),如果要存放在-20℃或-80℃,需先將樣品在4℃放置過夜后再轉移到后的溫度。注:將樣品轉移到-20℃或-80℃前,需要棄掉保護液。
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注意:
1. DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書對大腸桿菌可從固體培養(yǎng)基上挑取單個菌落直接進行煮沸法提取質粒DNA。     
2. 煮沸法中添加*有一定限度,濃度高時,細菌裂解效果反而不好。有時不同*也能溶菌。     
3. 提取的質粒DNA 中會含有RNA,但RNA 并不干擾進一步實驗,如限制性內切酶消化,亞克隆及連接反應等。


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