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人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞；BT-325培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-23 14:35:49瀏覽次數(shù)：630次

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產(chǎn)品簡介

人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞；BT-325培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞；BT-325培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   該細胞系于1985年由北京神經(jīng)外科研究所建立。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法   1:3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN4
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測熒光法（-）
STR   Amelogenin：XY；D8S1179：13,15；D21S11：29,32.2；D7S820：12,13；CSF1PO：11, 13；D3S1358：15, 16；TH01：8, 9；D13S317：13；D16S539：9,11；D2S1338：24；D19S433：14,15.2；vWA：14；THOX：8,11；D18S51：14,21；D5S818：10；FGA：19,23。
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞；BT-325培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
CM-H071   人腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H072   人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H073   人膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H084   人臍靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H085   人臍動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H086   人大隱靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H087   人冠狀動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H088   人腹膜毛細血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H089   人髂動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H090   人血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H091   人大隱靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基   100mL
CM-H092   人脈絡(luò)膜血管細胞*培養(yǎng)基   100mLC2orf57   2號染色體開放閱讀框57抗體
C2orf29   2號染色體開放閱讀框29抗體
C3orf21   3號染色體開放閱讀框21抗體
C1ORF74   1號染色體開放閱讀框74抗體
C1QTNF10   補體C1q和腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白10抗體
C1orf94   1號染色體開放閱讀框94抗體
CSNK1D   酪蛋白激酶δ1抗體
CD166   活化白細胞粘附分子抗體
C1orf191   1號染色體開放閱讀框191抗體
Cox A16 polymerase3D   柯薩奇病毒A16型聚合酶3D