【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠肺成纖維樣細胞;C57/B6-L使用說明書
形態特性 成纖維樣細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一正常雄性C57/B6小鼠的肺組織。2013年由中科院昆明細胞庫建立。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶 無
染色體
使用權限 A類
產品名稱 | 小鼠肺成纖維樣細胞;C57/B6-L使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
小鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)免疫試劑盒 Mouse matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA kit
小鼠基質γ羧基*蛋白(MGP)免疫試劑盒 Mouse Matrix Gla Protein,MGP ELISA Kit
小鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)免疫試劑盒 Mouse Creatine Kinase MM isoenzyme,CK-MM ELISA Kit
小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)免疫試劑盒 Mouse Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
小鼠肌酸激酶(CK)免疫試劑盒 Mouse Creatine Kinase,CK ELISA Kit
小鼠肌球蛋白重鏈(MHC)免疫試劑盒 Mouse myosin heavy chain,MHC ELISA Kit
小鼠肌球蛋白(MYS)免疫試劑盒 Mouse Myosin,MYS ELISA Kit
小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒 Mouse Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit
小鼠肌酐(Cr)免疫試劑盒 Mouse Creatinine,Cr ELISA kit二氰二胺 shēng huà shì jì 容量: 1克
二茂鐵 shēng huà shì jì 容量: 100克
二氯熒光素 shēng huà shì jì 容量: 25克
二硫化碳 shēng huà shì jì 容量: 5克
二硫化鉬 shēng huà shì jì 容量: RT 10克
二甲苯藍FF shēng huà shì jì 容量: 100毫克
二甲苯藍 shēng huà shì jì 容量: 保存:-20℃ 10毫克
二甲苯 shēng huà shì jì 容量: RT,避光 250克
二甲胺鹽酸鹽 shēng huà shì jì 容量: 100克
二苯乙醇酸 shēng huà shì jì 容量: 1克