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干細胞驟進行操作

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干細胞驟進行操作:
可以使用適當的裂解液裂解貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白,例如細胞核蛋白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關文獻提取這些亞細胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進行抽提。
收集完蛋白樣品后,為確保每個蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據所使用的裂解液的不同,需要采用適當的蛋白濃度測定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
(1)、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制,也可以使用博研生物的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
(2)、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關文獻資料配制,也可以使用我公司的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3)、上樣與電泳
冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內即可。為了便于觀察電泳效果和轉膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,使用預染蛋白質分子量標準。
電泳時通常*在上層膠時使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設置在80-100V,高電壓可以設置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見,也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式,通常把電壓設置在100V,然后設定定時時間為90-120分鐘。設置定時可以避免經常發生的電泳過頭。
通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據預染蛋白質分子量標準的電泳情況,預計目的蛋白已經被適當分離后即可停止電泳。
干細胞HPAF cDNA    人肺動脈成纖維細胞cDNA    20 reactions
HPAEpiC cDNA    人肺泡上皮細胞cDNA    20 reactions
HBEpiC cDNA    人支氣管上皮細胞cDNA    20 reactions
HTEpiC cDNA    人氣管上皮細胞cDNA    20 reactions
HSAEpiC cDNA    人小氣道上皮細胞cDNA    20 reactions
HPF cDNA    人肺成纖維細胞cDNA    20 reactions
HBSMC cDNA    人支氣管平滑肌細胞cDNA    20 reactions
HTSMC cDNA    人氣管平滑肌細胞cDNA    20 reactions
HSkMC cDNA    人骨骼肌細胞cDNA    20 reactions
HSkMSC cDNA    人骨骼肌衛星細胞cDNA    20 reactions
HSkMM cDNA    人骨骼肌成肌細胞cDNA    20 reactions
HRGEC cDNA    人腎小球內皮細胞cDNA    20 reactions
HRPTEpiC cDNA    人腎近曲小管上皮細胞cDNA    20 reactions
HRCEpiC cDNA    人腎皮質上皮細胞cDNA    20 reactions
HREpiC cDNA    人腎上皮細胞cDNA    20 reactions
HRMC cDNA    人腎系膜細胞cDNA    20 reactions
HBdSMC cDNA    人膀胱平滑肌細胞cDNA    20 reactions
HUC cDNA    人尿道上皮細胞cDNA    20 reactions
HBdSF cDNA    人膀胱基質成纖維細胞cDNA    20 reactions
HPEpiC cDNA    人前列腺上皮細胞cDNA    20 reactions
HPrF cDNA    人前列腺成纖維細胞cDNA    20 reactions
HPSMC cDNA    人前列腺平滑肌細胞cDNA    20 reactions
HCO cDNA    人顱骨造骨細胞cDNA    20 reactions干細胞

 


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