Deaza dGTP0.4mL實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
Deaza dGTP0.4mL實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現多個小片段）。
產品介紹：
產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
〖級別〗：BR
〖含量〗：≥98%(HPLC)
熒光性：λex 420 nm; λem 538 nm in 0.1 M Tris pH 8.0
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：粉末。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)適合熒光性研究
〖保存〗：RT
金黃三羧酸
〖英文名稱〗：ATA；Aurintricarboxylic acid
〖其他名稱〗：金精三羧酸
〖CAS號〗：4431-00-9
C22H14O9=422.34
〖級別〗：BR
〖含量〗：≥85%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深紅色至褐色粉末。溶于1 M NH4OH：10mg/ml
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)鋁試劑的中間體
〖保存〗：RT，保質期6年
硫黃素T
多聚 -L- 賴氨酸 (15-30 萬 ) UTP 溶液，2.5mM
多聚 -L- 賴氨酸 (3-7 萬 ) GTP 溶液，2.5mM
多聚 -L- 賴氨酸 (7-15 萬 ) CTP 溶液，2.5mM
D- 果糖 -6- 磷酸二鈉 預稀釋 BGG 蛋白標準品
*抑制劑 咪唑溶液，2M
Nα- 苯甲酰*乙酯 Zenker 固定液
二甲苯青 Helly 固定液
疊氮鈉 Carnoy 固定液
聚蔗糖 400 Karnovsky 固定液
L- * ( 氧化型 ) 10nt 隨機引物，0.5μg/μL
L-(+) 乳酸鋰鹽 Tth 核酸內切酶 IV
α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸 一站式* TUNEL 試劑盒 (FITC/POD)
天狼猩紅 DNase I 干粉
健那綠 B Oligo(dT) 纖維素
4’,6- 二脒基
