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胚胎裂解液1mL原理

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

胚胎裂解液1mL原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

胚胎裂解液1mL原理產(chǎn)品介紹：

胚胎裂解液1mL原理產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

〖保存〗：RT
鈣黃綠素二鈉鹽
〖英文名稱〗：Calcein disodium salt；Bis[N,N-di(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein disodium salt, Fluorescein-bismethyliminodiacetic acid disodium salt
〖其他名稱〗：鈣黃綠素鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：108750-13-6
C30H24N2Na2O13=666.50
〖級(jí)別〗：BS〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙色或棕色粉末或晶體，溶于水
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
鉻T
〖英文名稱〗：Eriochrome black T；1-(1-Hydroxy-2-naphthylazo)-6-nitro-2-naphthol-4-sulfonic acid sodium salt；C.I.Mordant black II；C.I. 14645
〖其他名稱〗：依來(lái)鉻T；羊毛鉻T；媒介T；酸性媒介T；1-(1-羥基-2-萘偶氮)-6-硝基-2-萘酚-4-磺酸鈉
〖CAS號(hào)〗：1787-61-7
C20H12N3NaO7S=461.38
〖級(jí)別〗：IND

PLPD 固定液   超快轉(zhuǎn)染試劑盒
Methacarn 固定液   高效 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
PFG 固定液   鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液，10mg/mL
對(duì)苯醌固定液   *抑制劑溶液，20mg/mL
ECD-G 固定液   細(xì)胞核微量制備試劑盒
細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒（PI 法）   干粉型 LB 培養(yǎng)基
Zamboni 固定液   銀染清除劑
考馬斯亮藍(lán) R-250 染液   鮭魚精 DNA 溶液
DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞   重蒸酚
SYBR Green II 核酸染料   酸酚
態(tài)細(xì)胞   Oligo dT12-18 引物，0.5μg/μL
   電泳溴酚藍(lán)溶液