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植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理

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植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（〖灼燒殘?jiān)剑?8.0～24.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙棕色結(jié)晶。253～254℃時(shí)分解。溶于水和乙醇，微溶于丙同和乙二醇乙迷，幾乎不溶于其他有機(jī)溶劑。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑，金屬著色劑。常用1%鈉鹽作指示劑
〖保存〗：RT
茜素黃R鈉鹽
〖英文名稱〗：Alizarin yellow R sodium salt；Sodium 5-[(4-nitrophenyl)azo]salicylate；Mordant Yellow 3R
〖其他名稱〗：對(duì)硝基苯偶氮*；茜草素黃R鈉鹽；媒染黃3R；茜素黃鈉鹽
〖CAS號(hào)〗：1718-34-9
C13H8N3NaO5=309.21
〖級(jí)別〗：IND
pH變色域：10.0（黃）～12.0（紅）
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
靈敏度試驗(yàn)：合格
水溶解試驗(yàn)：合格
〖灼燒殘?jiān)?以〖硫酸鹽〗計(jì))：18.0～24.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕黃色粉末。溶于水，其溶液呈棕黃色
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑，金屬著色劑。常用1%鈉鹽作指示劑
〖保存〗：RT
酸性茜素藍(lán)B

酪蛋白溶液 (TBS)   柱式病毒 DNAout
酪蛋白溶液 (PBS)   柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒
ONPG 干粉   柱式病毒 RNAout
Tris 緩沖鹽溶液 (TBS)   柱式凋亡 DNAout
氯萘酚溶液，3mg/mL   柱式動(dòng)物 DNAout
CN/DAB 底物套裝    柱式動(dòng)物 RNA-DNA 雙提試劑盒
ABTS 溶液，7mM    柱式動(dòng)物 RNAout
OPD 干粉   柱式動(dòng)物 RNAout
pNPP 干粉   柱式動(dòng)物線粒體 DNAout，PCR
DNA 包被溶液   柱式動(dòng)物線粒體 DNAout，測(cè)序
乙烯乙二醇   柱式凍存血液 DNAout
HRP 穩(wěn)定劑 / 稀釋劑   柱式凍存血液 DNAout
鹽酸胍溶液，8M   柱式分枝桿菌 DNAout
   柱式鼠尾 DNAout
   自誘導(dǎo)液體培養(yǎng)基