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閱讀：327發(fā)布時(shí)間：2021-4-7
雙尾RT-qPCR是什么呢？它是一種基于PCR法的miRNA定量檢測(cè)試劑盒。那么，就先從傳統(tǒng)microRNA PCR檢測(cè)法的痛點(diǎn)說(shuō)起吧~
傳統(tǒng)的PCR法檢測(cè)microRNA，兩個(gè)常規(guī)PCR引物的總長(zhǎng)度幾乎是microRNA長(zhǎng)度的兩倍，因此不適合于做miRNA的引物。以前的技術(shù)通過(guò)使用發(fā)夾引物延伸microRNA，添加poly A尾巴或通過(guò)連接添加片段來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題，但是這會(huì)降低檢測(cè)的靈敏度和特異性。此外，這些方法無(wú)法檢測(cè)在3'末端修飾的microRNA，因?yàn)樗鼤?huì)干擾延伸過(guò)程。
好了，說(shuō)到這里，在鄭重向大家介紹這款名為雙尾RT-qPCR技術(shù)。它的原理如下：
與使用單個(gè)結(jié)合探針不同，雙尾PCR使用兩個(gè)半探針，它們分別結(jié)合到不同的microRNA丨片段上，這些片段通過(guò)折疊的系鏈連接。雖然每個(gè)半探針本身都很短, 無(wú)法結(jié)合到microRNA上，但當(dāng)兩個(gè)半探針互補(bǔ)時(shí)，它們會(huì)協(xié)同結(jié)合，這種結(jié)合的特異性是非常高的，因?yàn)樵诙贪胩结樦绣e(cuò)配的影響非常大。然后可以使用兩個(gè)特定序列引物對(duì)形成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用SYBR進(jìn)行檢測(cè)。
怎么樣，有沒(méi)有明白一點(diǎn)了，那么接下來(lái)，了解一下它的優(yōu)勢(shì)吧！
1.高靈敏度：zui多少于10個(gè)分子；
2.高特異性
適合于多種樣本（血漿/血清，血液，組織等）中的miRNA檢測(cè)和定量
通過(guò)折疊的系鏈連接的兩個(gè)半探針（結(jié)合不同的microRNA丨片段）
動(dòng)態(tài)范圍廣（高達(dá)9 log）
在進(jìn)行單重qPCR之前，可進(jìn)行雙管多重RT-PCR
提供定制化服務(wù)
高靈敏度及特異性：
1）5´互補(bǔ)片段顯著提高分析的靈敏度：
2）5´ 互補(bǔ)片段顯著提高檢測(cè)的特異性：
適用樣本類(lèi)型豐富：
檢測(cè)流程簡(jiǎn)便：
文章來(lái)源：艾美捷科技
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