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艾美捷HRP標記親和純化山羊抗兔IgG(H+L)二抗參數(shù)介紹

時間:2023/5/4閱讀:100
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HRP(Horseradish Peroxidase,辣根過氧化物酶)是一種分子量達44000的糖蛋白,由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成,通常來源于辣根植物中,是臨床檢驗試劑中的常用酶。辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以很常用。HRP廣泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋 白,糖含量18%。由于其易于提取、價格相對低廉,同時性質(zhì)穩(wěn)定,耐熱及有機溶劑的作用,與抗原或抗體偶聯(lián)后,活性很少受損失,因此是迄今為止在免疫學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的一種標記用酶。HRP的催化底物包括色原底物、化學(xué)發(fā)光底物等,其中常用的色原底物有鄰苯二胺(OPD)、2,2’-吖嗪-(3-乙酰苯 基噻唑磺酸-6)(ABTS)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和4-氨基安-替-比-林:苯-酚耦聯(lián)底物對等;而化學(xué)發(fā)光底物則包括Luminol/增強劑等系統(tǒng)。

 

基于免疫電泳和/或ELISA,抗體與全分子兔IgG反應(yīng)。它還與其他兔免疫球蛋白的輕鏈發(fā)生反應(yīng)。未檢測到針對非免疫球蛋白血清蛋白的抗體。抗體可以與來自其他物種的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。

 

通過免疫親和層析從抗血清中分離出完整的IgG抗體分子。它們具有通過二硫鍵連接在一起的Fc部分和兩個抗原結(jié)合Fab部分,因此它們是二價的。據(jù)報道,平均分子量為約160kDa。整個IgG形式的抗體適用于大多數(shù)免疫檢測程序,并且是極-具成本效益的。

 

艾美捷HRP標記親和純化山羊抗兔IgG(H+L)二抗#111-035-003基本參數(shù):

應(yīng)用類型:WB(1:10000 - 1:200000)、ELISA(1:5000 - 1:100000) IHC(1:500 - 1:5000)

免疫原:兔IgG

來源宿主:山羊

反應(yīng)性:該山羊抗兔二抗與兔IgG分子有特異性反應(yīng),與其它兔免疫球蛋白(包括IgM、IgE、IgD、IgA等)的輕鏈有交叉反應(yīng)。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無交叉反應(yīng),但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應(yīng)。

保存建議:凍干粉保存在2-8°C,準備用時,根據(jù)指示的體積加入三蒸水,在2-8°C條件下,未稀釋的液體保質(zhì)期為6周,每天準備新鮮的工作液。如果溶解后想延長保存期,加入等體積的甘油(ACS級別或更好的)使終濃度為50%,保存在-20°C。另外也可以在沒有甘油時直接分裝,并冰凍在-70°C或以下,避免反復(fù)凍融。保質(zhì)期為收到貨物后至少1年,合適的保存方式可以延長保質(zhì)期。

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辣根過氧化物酶

辣根過氧化物酶(HRP)綴合物通過改良的Nakane和Kawaoi程序制備(J.Histochem.Cytochem.1974。22, 1084). 過氧化物酶偶聯(lián)物通常用于免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡和ELISA。親和純化的抗辣根過氧化物酶和綴合物可用于辣根過氧化物蛋白酶抗原的檢測或用于含HRP試劑的信號擴增。對于哺乳動物細胞的免疫染色,使用抗辣根過氧化物酶的優(yōu)點是背景減少,因為抗體不識別在這些細胞中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性過氧化物酶樣酶。


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