脂質(zhì)轉(zhuǎn)染（Lipofection）是一種基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，屬于生物化學(xué)方法，包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸鈣。脂質(zhì)轉(zhuǎn)染原理是將核酸與陽離子脂質(zhì)制劑結(jié)合。由此產(chǎn)生的分子復(fù)合物，稱為脂質(zhì)體，然后被細(xì)胞吸收。脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的主要優(yōu)點(diǎn)是效率高，能夠在廣泛的細(xì)胞類型中轉(zhuǎn)染所有類型的核酸，易于使用，可重復(fù)性強(qiáng)，毒性低。此外，該方法適用于所有轉(zhuǎn)染應(yīng)用（瞬時、穩(wěn)定、共轉(zhuǎn)染、反向、順序或多次轉(zhuǎn)染……）、高通量篩選測定，并且在一些體內(nèi)模型中也顯示出良好的效率。  

工作原理：

（1）DNA轉(zhuǎn)染機(jī)制：

用于脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的脂基試劑通常由合成的陽離子脂質(zhì)組成，其通常與輔助脂質(zhì)如DOPE（L-α-二油酰磷脂酰乙醇胺）或膽-固醇混合。這些脂質(zhì)混合物在生理pH值下以整體帶正電荷的脂質(zhì)體或膠束形式組裝，并能夠通過靜電相互作用與帶負(fù)電荷的核酸形成復(fù)合物（脂質(zhì)復(fù)合物）。脂基轉(zhuǎn)染試劑與核酸的結(jié)合使核酸受到緊密壓縮和保護(hù)，這些陽離子復(fù)合物主要通過內(nèi)吞作用內(nèi)化。一旦進(jìn)入細(xì)胞，有兩種導(dǎo)致核酸釋放到細(xì)胞質(zhì)中的機(jī)制。一種依賴于多陽離子殘基的核內(nèi)體緩沖能力（稱為“質(zhì)子海綿效應(yīng)"）。另一種是細(xì)胞帶負(fù)電荷的脂質(zhì)中和轉(zhuǎn)染試劑的陽離子殘基導(dǎo)致內(nèi)體膜不穩(wěn)定的能力。最后，導(dǎo)致核攝取DNA（siRNA不需要）隨后基因表達(dá)的細(xì)胞和分子事件仍然是高度推測性的。然而，細(xì)胞分裂對轉(zhuǎn)染效率的重要性有利于有絲分裂過程中核膜破壞促進(jìn)DNA核攝取的假設(shè)。盡管如此，通過脂質(zhì)轉(zhuǎn)染也可以實(shí)現(xiàn)原代細(xì)胞（非分裂）和體內(nèi)的轉(zhuǎn)染，這表明DNA可以進(jìn)入發(fā)生基因表達(dá)的細(xì)胞核。

（2）Tee-技術(shù)（Tee-Technology）：

陽離子脂質(zhì)體（脂質(zhì)復(fù)合物）和聚合物（多聚體）是最-常用的非病毒基因遞送系統(tǒng)。 Tee-Technology（觸發(fā)內(nèi)體逃逸）結(jié)合并利用這兩種實(shí)體的特性來實(shí)現(xiàn)極其高效的核酸傳遞到細(xì)胞中。實(shí)際上，這種新一代的脂多胺含有親脂性部分，如脂質(zhì)，和帶電荷的多胺部分，如陽離子聚合物。這些部分協(xié)同作用以確保核酸的緊密壓縮和保護(hù)，以及核內(nèi)體膜的非常有效的不穩(wěn)定，這允許大量核酸在細(xì)胞質(zhì)中釋放和DNA的核攝取。特別關(guān)注完-全可生物降解實(shí)體的合成。通過這種方式，轉(zhuǎn)染試劑不會干擾細(xì)胞機(jī)制，在每次實(shí)驗中都能保持高細(xì)胞活力，并避免任何潛在的副作用。

Tee-技術(shù)的主要優(yōu)勢在于：

納米顆粒中DNA的壓縮被細(xì)胞有效地內(nèi)化；

核酸對核酸酶降解的保護(hù)作用；

有效的膜不穩(wěn)定性和DNA遞送；

即使在核酸含量較低的情況下也具有高效性；

生物降解性。

艾美捷脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑#DG80500、#DF40500、#LL70500等的應(yīng)用：

轉(zhuǎn)染效率與高基因表達(dá)水平或高基因沉默和最小化細(xì)胞毒性相結(jié)合取決于多個關(guān)鍵參數(shù)。這些因素包括細(xì)胞類型、質(zhì)粒DNA特征（大小、啟動子、報告基因）和純度、siRNA序列和純度、細(xì)胞培養(yǎng)條件（含或不含血清的培養(yǎng)基、細(xì)胞數(shù)量、無污染......）、核酸和試劑的量、轉(zhuǎn)基因檢測等等。 因此，轉(zhuǎn)染試劑需要根據(jù)待遞送的核酸（DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA等）和使用的細(xì)胞類型進(jìn)行專門設(shè)計，以達(dá)到最佳效率。在此背景下，OZ Biosciences開發(fā)了幾種出色的轉(zhuǎn)染試劑：

DreamFect Gold：適用于所有核酸，獲得卓-越的轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平

DreamFect：適用于所有核酸，適用于所有細(xì)胞，包括懸浮細(xì)胞系

Lullaby：用于siRNA應(yīng)用

VeroFect：用于Vero細(xì)胞轉(zhuǎn)染

FlyFectin：用于昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染

EcoTransfect：用于流行的細(xì)胞系和低成本的常規(guī)轉(zhuǎn)染  

如何使用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑？

該protocol是一個非常簡單明了的程序，大體流程如下：

制備DNA和轉(zhuǎn)染試劑溶液。

將它們混合在一起并孵育20分鐘。

添加到您的細(xì)胞中。

脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)引用文章鑒賞：

Ferrari, R., Martin, G., Tagit, O. et al. MT1-MMP directs force-producing proteolytic contacts that drive tumor cell invasion. Nature Communications10, 4886 (2019).. （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質(zhì)轉(zhuǎn)染）

Karousis, E.D., Gurzeler, LA., Annibaldis, G. et al. Human NMD ensues independently of stable ribosome stalling. Nature Communications11, 4134 (2020). （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質(zhì)轉(zhuǎn)染）

Ramsay, E.P., Abascal-Palacios, G., Dai?, J.L. et al. Structure of human RNA polymerase III. Nature Communications11, 6409 (2020).  （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質(zhì)轉(zhuǎn)染）