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測(cè)定補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量
閱讀：81 發(fā)布時(shí)間：2023-8-71 儀器和試藥
儀器：Agilent 1100（四元泵）高效液相色譜儀；UV3210紫外分光光度計(jì)；試藥：甲醇（色譜純），水為純化水，其他試劑均為分析純。補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，供含量測(cè)定用，由中檢所提供。樣品：補(bǔ)骨脂藥材購(gòu)于廣東清平中藥材市場(chǎng)。
2 方法和結(jié)果
2.1 紫外吸收波長(zhǎng)的研究分別取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)作光譜掃描，結(jié)果補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在245 nm處均有最大吸收，故本含量測(cè)定項(xiàng)選擇245 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.2 色譜條件色譜柱：IntesilODS-3柱（5 μm,4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相：甲醇水（48：52）；流速：0.8 ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm；柱溫：25℃。補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的tR分別為15.9，18.2 min。
2.3 線性關(guān)系考察精密稱取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品各12.5 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精確吸取上述對(duì)照品溶液1，2，3，4，5 ml分別置于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μ１進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程分別為：補(bǔ)骨脂素Y=382 4X+0.8,r=0.999 7；異補(bǔ)骨脂素Y=429 2X－4.533 4，r=0.999 9；結(jié)果表明：補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在進(jìn)樣量0.2~1 μg范圍內(nèi)時(shí)呈良好的線性關(guān)系。
2.4 對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備
2.4.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升各含50 μg的混合溶液，即得。
2.4.2 供試品溶液的制備取本品1 g研細(xì)，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱提取4 h，放冷，提取液回收至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓糜?0 ml量瓶中，甲醇少量洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量。結(jié)果表明6次測(cè)定結(jié)果的平均值分別為1.47，1.72 mg/g，RSD分別為2.5%和2.8%。
2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μl，每間隔1 h測(cè)定1次，共測(cè)定5次，再過(guò)24 h測(cè)定1次，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)對(duì)同一批樣品6份，依法測(cè)定，平均含量分別為1.55 mg/g，RSD 2.4%；1.83 mg/g，RSD 2.6%，結(jié)果表明本法的重復(fù)性較好。
2.8 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量補(bǔ)骨脂藥材約1 g ，精密添加補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率分別為97.5%，RSD為2.8%；98.8%，RSD為2.5%（n=5）。
2.9 樣品測(cè)定精密吸取供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量，結(jié)果5批平均含量補(bǔ)骨脂素1.32 mg/g，異補(bǔ)骨脂素1.65 mg/g。