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巧克力平板培養(yǎng)基制作方法步驟
閱讀：154 發(fā)布時(shí)間：2024-6-3巧克力平板培養(yǎng)基是一種微生物培養(yǎng)基，在醫(yī)學(xué)和生物研究等方面已經(jīng)被廣泛使用。巧克力平板主要是用于奈瑟氏菌屬和嗜血桿菌等需氧菌的分離和培養(yǎng)。主要是蛋白胨和牛肉粉用來提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源氨基酸以及維生素。氯化鈉維持培養(yǎng)基中的滲透壓，瓊脂用做凝固劑。脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I，為嗜血桿菌屬的生長(zhǎng)提供特殊營(yíng)養(yǎng)。
巧克力平板培養(yǎng)基還能夠培養(yǎng)其他細(xì)菌，主要的原因還有血液中有V、X因子，這兩種因子是位于紅細(xì)胞中的，一般細(xì)菌不能利用，輕微的加熱（一般為75~85攝氏度左右）使紅細(xì)胞破壞釋放到細(xì)胞外方可利用。
巧克力培養(yǎng)基用途主要用于嗜血桿菌的分離，亦可用于奈瑟菌的增菌培養(yǎng)。原理流感嗜血桿菌培養(yǎng)時(shí)，需要依賴血液中的X及V因子方能生長(zhǎng)繁殖，當(dāng)培養(yǎng)基加熱至80～90℃時(shí)，可使血液中的紅細(xì)胞破裂，以利于嗜血桿菌，奈瑟菌等的生長(zhǎng)培養(yǎng)。凡疑有這些菌種存在的標(biāo)本，均應(yīng)接種巧克力平板。血液標(biāo)本培養(yǎng)，增菌后又細(xì)菌生長(zhǎng)，若移種巧克力平板上，有利于分離更多的細(xì)菌。成分牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化鈉5瓊脂15無菌脫纖維馬血、羊血或兔血100mlpH7.2～7.4
制備將前四項(xiàng)成分混合，加熱溶化，校對(duì)pH，高壓滅菌（121℃15min）后在80～90℃以無菌方法加入血液，搖勻后置90℃水浴中。維持該溫度15min，使之呈巧克力色取出，至室溫冷至約50℃，傾制平板 。凝固后，抽樣置于35℃培養(yǎng)18～24h，如無細(xì)菌生長(zhǎng)，冷藏備用。接種將可疑標(biāo)本直接劃線接種于該培養(yǎng)基上，置35℃普通培養(yǎng)或置含5%～10%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)18～24h，取出觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀況。觀察結(jié)果流感嗜血桿菌菌落微小(0.8mm),無色透明、光滑整齊、似露滴狀，48h后達(dá)1.5mm，從血液或腦脊液中分離的菌落往往形成液狀，菌落較大，老培養(yǎng)物菌落中心呈凹陷。質(zhì)量控制流感嗜血桿菌ATCC10211，生長(zhǎng)良好，菌落典型。肺炎鏈球菌，ATCC6305，生長(zhǎng)良好，菌落典型。
保存置冰箱，1周內(nèi)用完。
平板培養(yǎng)基制作方法如下：
① 將培養(yǎng)皿洗凈、干燥，使各培養(yǎng)皿蓋方向一致，用牛皮紙包好，或放入特制鐵罐內(nèi)，注明皿蓋的方向。高壓滅菌或干燥滅菌后備用。
② 取剛滅菌后尚未凝固的培養(yǎng)基置于無菌箱或超凈工作臺(tái)內(nèi)，略打開滅菌過的培養(yǎng)皿蓋(露一小縫)，倒入培養(yǎng)基(厚度為0.5cm)，封蓋、冷凝，倒置備用。