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417次隨著實驗室細胞培養的發展,除了原代培養之外,人工開發出來的細胞系的保存越來越重要。細胞冷凍的原理在于盡可能降低細胞內的晶體形成,減少細胞內水凝固所形成的高濃度溶質對細胞造成的低溫損傷,從提高細胞復蘇時的存活率。細胞凍存的數量應保證復蘇時低溫保護劑獲得稀釋,稀釋后的細胞濃度扔高于正常傳代的細胞濃度為宜,這是因為當低溫保護劑稀釋以后,該濃度一般不會對細胞造成毒性損傷。
通用細胞凍存液(無血清)主要由培養基、DMSO 等組成,不含血清,是一種經典的無菌凍存液。用于各種哺乳動物原代細胞、傳代細胞系、雜交瘤細胞等的凍存。
產品名稱:通用細胞凍存液(無血清)
規 格:50ml
用 途:培養細胞的凍存
注意事項:無菌溶液。不含血清,由培養基、冷凍保護劑組成。注意無菌操作,避免反復凍融。 一般遵循1℃/min的速率進行冷凍。亦可采用4℃ 20min,-20℃ 30min,-70℃ 過夜,后置于液氮罐中長期存儲。
儲存條件:—20℃,24個月
冷凍保存細胞系的優點如下
1、減少基因漂移;
2、減緩細胞系的衰老;
3、穩定表型;
4、減少微生物污染及交叉污染機會等。
操作步驟:
1、培養細胞至對數生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等,取狀態良好的細胞進行凍存操作。如為貼壁生長細胞,用胰蛋歸酶消化并用*培養基終止消化,進行細胞計數;如為懸浮生長細胞,進行細胞計數。
2、離心,棄上清。
3、加入適量的通用細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到/ml,置于凍存管中,密閉、不要擰的太緊,避免彎曲變形。
4、一般進行冷凍。亦可采用-20°C 30min, -70°C 過夜,后置于液氮罐中長期存儲。
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