Western Blot 即免疫印跡試驗，可以利用 Western Blot 來比較在不同條件下，不同細胞組織中目的蛋白表達量的差異，屬于定性，半定量試驗。既然有差異性比較，參照物*。Western Blot 試驗中的標準（表達量）參照物即內(nèi)參，有了參照物才能準確地比較目的蛋白表達量的差異。內(nèi)參一般選用管家基因表達的蛋白，它們在各個組織細胞中表達相對恒定，不會因為外部條件變化而引起表達量的變化。而且內(nèi)參可以監(jiān)測整個試驗體系是否正常，比如蛋白提取過程，轉(zhuǎn)膜體系，顯色體系等。

beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作為成熟的內(nèi)參運用到試驗中，下面就大致介紹下如何選擇內(nèi)參：

樣本來源

● 如果是哺乳動物的組織或細胞，主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 為代表；

● 如果是植物樣本，主要以 actin、Rubisco 為代表。

目的蛋白定位

● 全細胞蛋白和細胞質(zhì)：beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 等；

● 細胞核蛋白: PCNA 等；

● 核膜蛋白：Lamin B1 等；

● 胞膜蛋白：Na(+)/K(+) ATPase 等。

目的蛋白分子量

beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 的分子量分別是 42kd，50kd，37kd，目的蛋白分子量能與內(nèi)參蛋白分子量相差 5kd 以上，才能分開目的蛋白和內(nèi)參，寫文章做圖也更美觀；

三大內(nèi)參

beta Actin，肌動蛋白，細胞骨架蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。beta Actin 作為內(nèi)參是得到*的，針對大多數(shù)組織和細胞來說的，它廣泛分布于細胞質(zhì)內(nèi)，表達量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細胞內(nèi)，beta Actin 的表達量就很少。

GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶，該酶是糖酵解反應中的一個酶，幾乎在所有組織細胞中都高水平表達，在同種細胞或組織中的表達量一般是恒定的，且很少受外部誘導物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，會增加 GAPDH 在特定細胞和組織中的表達。

beta Tubulin，微管蛋白，細胞骨架蛋白。作為內(nèi)參抗體，beta Tubulin 表達通常不會發(fā)生改變，因此被廣泛用于 Western Blot 內(nèi)參，也常被用于免疫染色觀察細胞的微管結構。