如果一抗上直接加標(biāo)記，不但不能保證抗體抗原反映的特異性，也不能保證實驗的可重復(fù)性。

    首先，由于抗體都是人工去設(shè)計的，對于一個人工設(shè)計的蛋白質(zhì)來說，你可以設(shè)計一個很好的抗體與他結(jié)合；然而對于天然蛋白質(zhì)，你不能保證一個很高的識別率和準(zhǔn)確度。所以，針對1抗，我們可以設(shè)計出完美的2抗，然而針對原蛋白質(zhì)，你無法設(shè)計一個特別完美的1抗。所以，直接標(biāo)記1抗的出來的結(jié)果是不準(zhǔn)確的，而標(biāo)記2抗是相對于1抗直接標(biāo)記來說更準(zhǔn)確的，所以經(jīng)過大量的實驗之后人們拋棄了直接標(biāo)1抗的方法。當(dāng)然，標(biāo)2抗也不是*完美的，當(dāng)然你也可以標(biāo)3抗，4抗，不過那個成本就指數(shù)上升了，在保證一定的置信度的情況下，人們一般標(biāo)到2抗就夠了。

    其次，對于同一個抗原，不同來源的1抗所識別的位置可能會有很大差異。這樣，你就無法保證試驗的可重復(fù)性。而1抗作為抗原來講，可以將它的抗原決定簇設(shè)計的一樣，這樣針對不同的1抗，2抗是可以保證差不多一個樣子的。而且這也給節(jié)約成本和方便標(biāo)記帶來了方便。

    所以一般現(xiàn)在都是2步標(biāo)記，第一個原因是主要的，第二個原因是次要的。