古朵快訊：免疫組織化學抗原修復

　　由于石蠟切片標本多數使用甲醛固定，甲醛在組織中所形成的醛鍵、羧甲基等封閉了部分抗原決定簇，或由于蛋白分子之間的交聯而使抗原決定簇隱蔽。因此在染色前有些抗原需要先進行抗原修復或暴露才能使組織中的抗原抗體充分結合，出現理想的染色結果。至于哪種抗原需要進行修復。需在建立染色程序時確定。常用的方法有加熱抗原修復法和酶消化法兩種。經大量試驗驗證.加熱抗原修復法優于酶消化法，其機制目前仍不清楚，可能是加熱打開了組織抗原因甲醛固定所引起的抗原決定簇的交聯，因此使免疫組織化學染色的敏感度大幅度提高。

　　(1)加熱修復法：加熱修復法分為高壓加熱修復法和微波修復法兩種：

　?、俑邏杭訜嵝迯头ǎ喝∫欢胯蹤此猁}緩沖液(pH=6.0)于高壓鍋中，大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放人己沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣緊壓力閥，繼續加熱至噴汽。從噴汽開始計時.1～2分鐘后，高壓鍋離開熱源，冷卻至室溫(稍冷后，可在自來水籠頭下加速冷卻)，取出玻片，先用蒸餾水沖洗2次，再用PBS沖洗2次，每次3分鐘。注意加熱時間長短的控制很重要，從組織切片放人緩沖液到高壓鍋離開火源的總時間控制在5―8分鐘為好.時間過長可能會使染色背景加深。緩沖液的量必須保證能浸泡到所有切片，用過的枸櫞酸緩沖液不能反復使用。

　?、谖⒉ㄐ迯头ǎ喝∫欢縫H 6.0枸櫞酸鹽緩沖液(緩沖液量不得小于500m1)，于微波盒中，微波加熱直至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩沖液中，中微波繼續處理15―20分鐘，取出微波盒冷卻至室溫，從緩沖液中取出玻片。先用蒸餾水沖洗2次，之后用PBS沖洗2次，每次3分鐘。

　　(2ygbm消化修復法：主要用于細胞內抗原的顯示。使用0.1%氯化鈣液(pH7.8)制成0.1%ygbm液，37℃孵育切片15～30分鐘，之后用PBS洗滌3次，每次3分鐘。

　　(3)ygbm消化修復方法：主要用于細胞間質抗原的顯示。一般使用濃度為0.4%，消化時間為37℃，30～180分鐘。

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