豬多肽YYelisa檢測(cè)試劑盒 操作步驟
1.加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 7 孔，依次加入 100μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 （見試劑準(zhǔn)備 2）。空白孔加 100μL（見試劑準(zhǔn)備第二步*后一管），余孔加待測(cè)樣品 100μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 溫育 2 小時(shí)。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。
3.每孔加檢測(cè)溶液 A 工作液 100μL（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 溫育 1 小時(shí)。
4.棄去孔內(nèi)液體，每孔用 300μL 的洗滌液洗滌，浸泡 1-2 分鐘，吸去 （不可觸及板壁） 或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次 （也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干），重復(fù)洗板 3 次。*后一次洗滌后，要把孔內(nèi)的洗滌液*甩干。自動(dòng)洗板機(jī)亦可。
5.每孔加檢測(cè)溶液 B 工作液 （臨用前配制）100μL，加上覆膜，37℃ 溫育 1 小時(shí)。
6.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 5 次，方法同步驟 4。
7.每孔加底物溶液 90μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 避光顯色 （反應(yīng)時(shí)間控制在 15-25 分鐘，不要超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。
8.每孔加終止溶液 50μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不勻一，請(qǐng)輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以使溶液混合均勻。
9.在確保酶標(biāo)板底無水滴及孔內(nèi)無氣泡后，立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度 （O.D. 值）。
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