上月中旬，貴州大學王老師在我司訂購了小鼠免疫球M(IgM)elisa試劑盒。實驗結束后，反映陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術分析如下：

1. 試劑盒必須在有效期內使用， 超過有效期的產品可能會產生很弱的信號；

2. 試劑盒沒有按規定進行保存，受高溫影響；

3. 試劑、樣品用前未平衡至室溫；

4. 加入試劑的體積和時間有誤， 移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔；

5. 洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力；

6. 孵育時間及孵育溫度未達到要求 ，反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整；

7. 洗板次數過多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長；

8. 顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入；

9. 底物作用時間不夠；

10. 蒸餾水水質有問題；

實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規定儲藏。

確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當。校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應*。

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

孵育溫度應控制在37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。保溫期內不宜多開門，以免影響保溫。

嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數。

顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入準確定時間。