還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒微量法說明書，注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

GSH是細胞內最主要的抗氧化巰基物質，在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此，測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。

測定原理：

DTNB與GSH反應生成復合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。

自備實驗用品及儀器：

低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。

還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒粗酶液提取：

1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

2.細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500 萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測

3. 血清等液體：直接測定。

GSH測定操作：

1.分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到412nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μ L蒸餾水，140μ L試劑二，40μ L試劑三，混勻靜置2min 后測定412nm吸光度A1。
4. 測定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μ L上清液，140μ L試劑二，40μ L試劑三，混勻靜置2min后測定412nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測定一次。
GSH 含量計算公式：
GSH 標準曲線公式：y=1.5x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值） 

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V 反總÷V 樣÷Cpr =6.67×(A2－A1) ÷Cpr
（2） 按樣本質量計算
GSH（μ mol/g）=(A2－A1) ÷1.5×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=6.67×(A2－A1) ÷W
（3） 按細胞數量計算
GSH（μ mol/104cell）=(A2－A1) ÷1.5×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)
=6.67×(A2－A1) ÷細胞數量
（4） 按液體體積計算
GSH（μ mol/mL）=(A2－A1) ÷1.5×V 反總÷V 樣 =6.67×(A2－A1)
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μ L=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量
還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒b.使用96孔板測定的計算公式如下
GSH 標準曲線公式：y=0.75x（x 為GSH濃度，μ mol/mL；y為吸光值）
（1） 按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V 反總÷V 樣÷Cpr =13.34×(A2－A1) ÷Cpr
（2） 按樣本質量計算
GSH（μ mol/g）=(A2－A1) ÷0.75×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=13.34×(A2－A1) ÷W
（3） 按細胞數量計算
GSH（μ mol /104cell）=(A2－A1) ÷0.75×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)
=13.34×(A2－A1) ÷細胞數量
（4） 按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷0.75×V 反總÷V 樣 =6.67×(A2－A1)
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣總：上清液總體積，1mL；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μ L=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量
還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒注意事項：
1.試劑一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

2.檢出限為1mmol/L。