試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板(Assay plate )：一塊(96孔)。
2. 標準品(Standard)：6瓶。
3. 生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶。
4. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶。
5. 生物素標記抗體(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)
6. 底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。
7. 濃洗滌液(Wash Buffer)：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
ELISA試劑盒操作注意事項：
1)試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7)底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作
