白細胞介素-4是趨化因子家族的一種細胞因子。白細胞介素是由多種細胞產(chǎn)生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于是白細胞產(chǎn)生又在白細胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。由白細胞產(chǎn)生又在白細胞間起調(diào)節(jié)作用的細胞因子。現(xiàn)在是指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能已基本明確，具有重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細胞因子，它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細胞，介導(dǎo)T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。
現(xiàn)將工作原理公布如下: 采用雙抗體夾心法測定大鼠白細胞介素 4(IL-4)水平。用純化的大鼠白細胞介素 4(IL-4)抗體包被微孔板，制成固相載體，實驗時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入 HRP 標(biāo)記的白細胞介素 4(IL-4)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成。顏色的深淺和樣品中的 IL-4 含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測試樣品中白細胞介素 4(IL-4)濃度。
白細胞介素-4樣品收集、處理及保存：
1、細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2、細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3、 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，1000×g離心15分鐘，收集上清。
5、體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6、組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。
7、樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
8、保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
