在PCR儀上完成一個PCR反應(yīng)所需要的時間決定于以下幾個因素：
1、模塊升溫和降溫時間
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間
3、延伸時間
4、循環(huán)次數(shù)
下面就以上幾點做一點分析，以便大家了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。
1、模塊升溫和降溫度時間
PCR儀一般會標(biāo)明升溫速度和降溫速度，但標(biāo)的大多是zui大變溫速度，也就是說是瞬間達(dá)到的速度。而與實驗相關(guān)的平均升降溫速度只有極少量廠家標(biāo)明。以平均2度和4度(能做到平均升降溫4度的儀器極少)來計算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每一個循環(huán)差20秒鐘。以一般35個循環(huán)來計算，影響實驗時間700秒，也就是不到12分鐘。實際還要考慮過沖問題，影響時間還會少些。
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時間
模塊溫度達(dá)到后，PCR管內(nèi)的溫度遠(yuǎn)沒有達(dá)到(塑料和水的導(dǎo)熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上)，需要時間來使二者達(dá)到平衡。一般有四種辦法來減少這一時間，一是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達(dá)到時降到目標(biāo)溫度，但太高的過沖可能造成實際溫度過沖，影響PCR反應(yīng)結(jié)果；二是減少PCR反應(yīng)液的體積，但體積變小時PCR反應(yīng)的可靠性會降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄時強(qiáng)度不夠；四是增加PCR管與模塊貼附程度。
3、延伸時間
延伸時間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關(guān)。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時，可能考慮將延伸時間變?yōu)?(即兩步法)；采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實驗都可以用高速的DNA聚合酶。
4、循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關(guān)。
所謂快速PCR技術(shù)是將快速PCR儀與超薄管(或特殊貼附技術(shù))以及高速DNA聚合酶等技術(shù)整合在一起，可達(dá)到較短時間完成PCR反應(yīng)。而一些廠家在向用戶推xiao PCR儀時，不去說明快速PCR技術(shù)，只強(qiáng)調(diào)PCR儀速度快(大都用zui大升降溫速度來HuYou用戶)。好像買了快速PCR儀后，原來1個半小時的擴(kuò)增時間變會縮短成半小時似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實驗結(jié)果。特別是進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增的用戶，系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。
快速PCR技術(shù)與快速PCR儀是兩回事?？焖貾CR儀只能縮短PCR反應(yīng)時間10分鐘左右，要實現(xiàn)真正的快速PCR反應(yīng)，還需要其他一些努力。大多數(shù)用戶根本就不需要快速PCR技術(shù)。
