魚5-吡咯啉酶聯免疫分析
檢測范圍：
96T
10U/L -240 U/L
使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關液體樣本中 5-吡咯啉
（P5CRs）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚 5-吡咯啉
（P5CRs）
（P5CRs）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
（P5CRs），再與 HRP標記的  5-吡咯啉          （P5CRs）
。用純化
的魚 5-吡咯啉
依次加入 5-吡咯啉
抗體
，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物  TMB 顯色。TMB  在
HRP  酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的
5-吡咯啉          （P5CRs）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），
通過標準曲線計算樣品中魚 5-吡咯啉
（P5CRs）濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶標試劑
標準品（480U/L）
標準品稀釋液
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過
物酶的（HRP）活性。
魚5-吡咯啉酶聯免疫分析操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
240 U/L
120 U/L
60 U/L
30 U/L
15 U/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液：將 30倍濃
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜
重復 5次，拍干。
30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
操作程序總：
魚5-吡咯啉酶聯免疫分析計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上
，根據樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與  OD值計算出標