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上海信帆生物代理銷售神經肽放免試劑盒，現貨供應，歡迎。
一．試劑盒的組成
1. 抗體 瓶，（每瓶加緩沖液 ml復溶）。
2．125I 標記物 瓶,（每瓶加緩沖液 ml復溶）。
3． 標準品25.6ng，使用時用緩沖液稀釋成每100ul分別含2.5、
5、10、20、40、80、160、320、640、1280pg的標準品。方法：標準品瓶內加入2ml緩沖液充分混勻,即為每100ul含1280pg的標準品,然后吸取500ul標準液再用500ul緩沖液稀釋即為640pg濃度, 依次倍比稀釋至每100ul含 2.5pg。加樣時5、20pg兩點可以不做。注意每一個濃度務必充分混勻。
4．分離劑：50ml/瓶。（用前充分混勻）
5．緩沖液：50ml/瓶。
6．說明書1份。
收到試劑盒后應2-8℃保存。在2周內進行標本測定，使用中應避免反
復凍融。試劑盒NSB應在10%以內，B0值在30~40%之間。
二．操作步驟
1. 平衡飽和加樣程序
多用于組織提取液中神經肽含量的測定。以大鼠垂體、下丘腦β-EP免疫活性物質含量測定為例。
大鼠垂體、下丘腦β-EP含量的RIA 測定程序（總反應體積300ul）
| 標 準 曲 線* | 樣 本** | |||||||||||
| T | NSB | B0 | 2.5 | 10 | 40 | 80 | 160 | 320 | 640 | 1280 | 垂體 | 下丘腦 |
管 號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
β-EP標準品 | / | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | / | / |
樣 品 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 1 | 100 |
β-EP抗血清 | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
緩 沖 液 | / | 200 | 100 | / | / | / | / | / | / | / | / | 99 | / |
125I-β-EP | 每管各加100μl、混勻 | ||||||||||||
孵 育 | 4℃孵育 24h | ||||||||||||
分 離 | 加分離劑500ul/管，混勻、室溫放置45分鐘。4000r/20min離心,即刻棄上清。 | ||||||||||||
計 數 | 測定沉淀的cpm 值（B）。 | ||||||||||||
*標準曲線宜做2-3條，既同一濃度應有2-3個管。
**腦組織及其它們提取液（樣品）的加樣量，應根據各組織內神經肽的含
量來確定加樣量?？偧訕恿坎蛔?00ul者用緩沖液補足。
2. 順序飽和加樣程序
用于神經肽含量較低的樣本，如血漿、腦脊液、推挽灌流液中神經肽的含量測定。以人血漿AVP免疫活性物質含量測定為例。
人血漿AVP含量RIA測定程序（總體積500ul）
| 標 準 曲 線 | 樣本 | |||||||||||
| T | NSB | B0 | NSB墊 | 2.5 | 10 | 40 | 80 | 160 | 320 | 640 | 1280 | 血漿 |
管 號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 |
AVP標準品 | / | / | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | / |
樣 品 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 300 |
無肽血漿 | / | / | / | 400 | / | / | / | / | / | / | / | / | / |
AVP抗血清 | / | / | 100 | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
緩沖液 | / | 400 | 300 | / | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | / |
孵 育 | 4℃ 孵 育 24h | ||||||||||||
125I-AVP | 每 管 各 加100ul、混勻 | ||||||||||||
孵 育 | 4℃ 孵 育 24h | ||||||||||||
分離劑 | 加分離劑500ul/管，混勻、室溫放置45分鐘。4000r/20min離心，即刻棄上清。 | ||||||||||||
計 數 | 測定沉淀的cpm 值（B）。 | ||||||||||||
附：無肽血漿的制備（用于血漿的直接測定）：
取4%加膜活性炭2ml離心，棄上清，加等體積血漿，充分振蕩10min，再離心(4000rpm,10min)，取上清。上清液重復離心1-2次，即為無肽血漿。血漿中的生物活性物質被活性炭吸附而去除。血漿樣本加樣量，要在預實驗中摸索，每次測定要有正常樣品對照。神經肽的RIA，影響因素較多，要特別注意細心操作。
三．標準曲線的繪制和樣本含量的計算
本法分離沉淀計數為結合（B）的cpm數。計算標準管與zui大結合（B0）的比值（B/ B0）×100%，以不同濃度的對數值為橫坐標，B/ B0的百分比為縱坐標，在半對數紙上繪制標準曲線，從標準曲線上找出所測樣本抗原（神經肽）的含量（上述計算通?？梢杂捎嬎銠C處理），再換算成每ml血漿或每mg組織濕重或每mg蛋白某種神經肽的含量。
如果計數器的本底較高，一定要從計算中扣出本底，一般NSB要小于10%。
