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ELISA試劑盒免疫檢測技術

時間:2018/12/29閱讀:544
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         ELISA試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。
ELISA檢測試劑盒將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。
然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合,ELISA試劑盒洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,ELISA檢測試劑盒只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,ELISA試劑盒并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
ELISA實驗成功的前提是樣本的正確處理加上實驗途中正確的操作,正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步。通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,下面就簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。
1、  血清
血清是zui常用于ELISA檢測試劑盒的一類樣本,處理也比較簡單。
用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一晚,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測試劑盒中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
2、  血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
3、  細胞培養上清
取細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
4、  尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。
總的來說,因為ELISA檢測試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應離心去除。

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