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常有ELISA操作者抱怨試驗復(fù)雜,而經(jīng)驗豐富的老師們會覺得很簡便,一是熟能生巧,二是把握了其間的隱秘。
ELISA隱秘要點(diǎn)之加樣:
在ELISA試劑盒中除了包被外,一般需進(jìn)行45加樣。在定性測定中有時不強(qiáng)調(diào)加樣量的性,此刻應(yīng)該運(yùn)用相同口徑的滴管,保持的加樣姿勢,使每滴液體的體積根本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)則配制。加樣時應(yīng)將液體加在孔底,防止加在孔壁上部,并留意不可出現(xiàn)氣泡。
ELISA隱秘要點(diǎn)之洗刷:
洗刷在ELISA試劑盒過程中不是反響聚,但卻是決議試驗勝敗的關(guān)鍵。洗刷的目的是洗去反響液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反響過程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質(zhì)。洗刷如不*,特別在zui后一次,如有酶結(jié)合物的非特異性吸附,將使空白值升高。別的,在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈,也將與酶標(biāo)抗體效果而產(chǎn)生攪擾。
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