人轉錄因子AP-1試劑盒準備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA )、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 400 0 p g/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管, 每 管加入標本稀釋液 20 0ul 。在第一管中加入 400 0 p g/ml 的標準品溶液 2 00ul 混勻后用加樣器吸出 2 00ul ,移至第二 管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 2 00ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
結果計算與判斷
1. 所有 OD 值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 為橫坐標, OD 值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3. 根據樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應 E2F1 含量 ,再乘上稀釋倍數即可 。
試劑盒性能
1. 靈敏度 : 最小的E2F1 檢測濃度小于 15 pg/ml。
2. 特異性: 可同時檢測重組或天然的人 E2F1 。 不與 人其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性:板內、板見變異系數均小于8.9%。
人胚胎,皮膚,肌肉;M-20
人胚胎,皮膚,肌肉;M-22
人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1
人羊膜細胞;WISH
人胚肺成纖維細胞;MRC-5
人胚胎肺成纖維細胞;WI-38
人胚腎細胞;293 [HEK-293]
人淋巴細胞;1301
人胚肺二倍體細胞;KMB-17
人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]
人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]
人胚肺成纖維細胞;MRC-5
人羊膜細胞;WISH
人正常肝細胞;L-02
人胚肺細胞VA13細胞;WI-38 VA13亞系2RA
人胚肺二倍體細胞;HL
人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2
人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C
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