研生試劑-印跡膜抗原檢測

          elisa試劑盒檢測過程是連續進行的。在印跡膜經過處理可用于抗原檢測之前，須再進行封閉以防免疫試劑的非特異性吸附。將印跡膜與一定濃度的蛋白質或去污劑溶液孵育可實現封閉。然后通過抗體與在固定膜上的蛋白質結合來定位抗原。抗原可用易識別的示蹤劑標記的抗體進行檢測。抗體本身可以標記，直接用于檢測抗原，但更為常見的是，使用的抗體是非標記的，而用標記的二級試劑來進行抗原定位。常用的標記方法有酶聯法，一般是用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶。

(一)印跡膜上非特異性蛋白質結合位點的封閉

    盡管這些封閉液在某些情況下使用較為滿意，但是仍需要仔細選擇以確保其能適合于檢測試劑。例如，若用A蛋白質作為檢測試劑，用全血清封閉就不可取。取一張新鮮膜，先對其封閉，然后用檢測系統測試便可了解2種試劑是否相匹配。

幾乎適合于所有檢測系統的兩種封閉緩沖液是脫脂奶粉(Johnson等，1984)和牛血清白蛋白(Towbin等，1979)。若蛋白質—封閉液造成本底過高或干擾檢測，則可試用吐溫20封閉液(Batteiger等，1982)。

常用的封閉液

若不愿每次新鮮配制封閉緩沖液，應加入o．01％硫柳汞制劑作為防腐劑。避免使用*，因其能抑制辣根過氧化物酶的活性。

(二)直接與間接檢測方法

             elisa試劑盒直接檢測是指將*抗體(一抗)純化并標記的方法。該抗體與印跡膜結合后的本底較低，并且在同一張印跡膜上可同時使用來源或特異性不同的多種抗體。但直接法工作量較大，需自己制備試劑，靈敏度亦不如間接法。

    間接檢測是指先使用非標記的一抗，然后用可與一抗的表位結合的標記第二抗體(二抗)進行檢測的方法。這種免疫復合物使得一種標記抗體(常用商品試劑)可以檢測同一種屬來源的所有一抗，同時由于結合了多個二抗分子具有放大效應，因而靈敏度較高。

因此，除非需要直接檢測抗原的特異性，否則是選擇間接法進行免疫印跡測定。通常，大多選用與辣根過氧化物酶結合的抗免疫球蛋白抗體商品試劑來檢測一抗。這樣可以使用少數幾種檢測試劑，分別針對不同種屬來源的一抗。因此，一個實驗室只需備用針對小鼠、大鼠、家兔和其他一抗的少數幾種通用試劑即可滿足各種免疫印跡試驗的要求。